Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｎ ｍｙｅｌｉｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｌｉａｌ ｍｉｃｅ Ｓｕｎ ＸｉｕｆａＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｕｔｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ Ｔｏｎｇｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｗｕｈａｎ ４３００３０ Ｃｈｉｎａ

　　Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｎ ｍｙｅｌｉｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｌｉａｌ ｍｉｃｅ ｂｙ ＲＴＰＣＲ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １３５ ｗｅａｎｌｉｎｇ ｆｅｍａｌｅ ＢａｌｂＣ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｇｉｖｅｎ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ｉｏｄｉｎｅ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ． Ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ＮＣ ｔａｐ ｗａｔｅｒ ｈｉｇｈ ｉｏｄｉｎｅ ｉｎｔａｋｅ ｇｒｏｕｐ ＨＩ ３．０ｍｇＬ Ｉ ｏｆ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｈｉｇｈ ｉｏｄｉｎｅ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ Ｉ ＨＩ＋Ｓｅ ３．０ｍｇＬ Ｉ ＋０．５ｍｇＬ Ｓｅ ｏｆ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ． Ａｌｌ ｔｈｅ ｍａｌｅ ａｎｄ ｆｅｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｍａｔｅｄ ａｆｔｅｒ ４ ｍｏｎｔｈｓ ｌａｔｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｆｉｌｉａｌ ｍｉｃｅ ｏｎ １４ ｄａｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｆｉｌｉａｌ ｍｉｃｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＮＣ ｇｒｏｕｐ ｓｅｒｕｍ ＴＴ４ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ＨＩ ｇｒｏｕｐｓ ＴＴ３ ａｌｓｏ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ａｎｄ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＢＰ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒｕｍ ｗａｓ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ２７％． Ｔｈｅ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆ ＴＴ４ ａｎｄ ＴＴ３ ｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＢＰ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒｕｍ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＨｉｇｈＩｏｄｉｎｅ Ｉｎｔａｋｅ ｃａｎ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ ｏｆ ｆｉｌｉａｌ ｍｉｃｅ ｗｈｉｃｈ ｍａｙｂｅ ｉｓ ｔｈｅ ｒｅａｓｏｎ ｆｏｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＢＰ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒｕｍ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｃａｎ ｂｅ ｓｏｍｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ ｂｕｔ ｎｅｅｄ ｔｏ ｖｅｒｉｆｙ ｍｏｒｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ＨｉｇｈＩｏｄｉｎｅ Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ＭＢＰ ｍ ＲＮＡ Ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ

１ 材料與方法

１．１ 實(shí)驗動(dòng)物
　　選用Ｂａｌｂｃ小鼠１３５只，雌雄為２∶１，體重１８～２２ｇ。適應性喂養一周后，按體重隨機分為３組，每組４５只動(dòng)物，劑量和分組如下：正常對照組ＮＣ，飲用自來(lái)水；碘過(guò)量組ＨＩ飲用水中加入ＫＩＯ３，使其碘濃度為３ｍｇＬ；碘過(guò)量＋Ｓｅ組ＨＩ＋Ｓｅ，飲用水中加入ＫＩＯ３和Ｎａ２ＳｅＯ３，使其碘濃度為３ｍｇＬ，硒濃度為０．５ｍｇＬ。各組均飼以純系鼠飼料。
　　親代鼠喂養４個(gè)月后雌雄２∶１合籠，各組所生仔鼠繼續在相同條件下喂養。孕１９．５ｄ親代鼠摘眼球取血，分離肝臟；仔鼠出生后１４ｄ摘眼球取血，分離腦組織，液氮速凍后，－７０℃保存測定相關(guān)指標。
１．２ 測定指標及其測定方法
１．２．１　血清甲狀腺激素測定：摘眼球取血分離血清，采用放射免疫分析法測定血清ＴＴ４、ＴＴ３，試劑盒由中國原子能研究所提供。
１．２．２　腦組織中激素水平的測定：小鼠斷頭處死在冰盤(pán)上迅速剝離大腦液氮保存用于制備組織激素提取物。組織激素提取物的制備參照文獻７方法進(jìn)行：從液氮中取出大腦，分別加入１ｍｌ生理鹽水，電動(dòng)勻漿器勻漿，以甲醇∶ＮａＯＨ２０ｍｍｏｌＬ＝４００∶１Ｖ∶Ｖ提取組織中的Ｔ３、Ｔ４，振搖３ｍｉｎ， ４℃過(guò)夜， ３５００ｒｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，取上清，４５℃氮氣吹干，以０．５ｍｌ ０．０４ｍｏｌＬ ＮａＯＨ溶解。參照血清激素水平測定方法進(jìn)行Ｔ３、Ｔ４的測定，同時(shí)以牛血清白蛋白為標準ＢＳＡ，按Ｌｏｗｒｙ法進(jìn)行蛋白定量。
１．２．３ ＭＢＰ ｍ ＲＮＡ 的測定：半定量RTPCR檢測MBP mRNA水平。采用Ｔｒｉｚｏｌ試劑盒提取腦組織總ＲＮＡ，將ｍＲＮＡ逆轉錄為ｃＤＮＡ后行ＰＣＲ。產(chǎn)物電泳后置ＢｉｏＤｏｃＡｎａｌｙｚｅ凝膠圖像分析系統進(jìn)行灰度分析，經(jīng)ＧＡＰＤＨ校正。引物序列及反應條件如下：ＭＢＰｓｅｎｓｅ ５’ＧＧＡＣＡＡＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＴＴＴＴ３’ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５’ＴＧＧＴＴＧＡＴＧＴＡＧＣＣＣＡＡＴＡＣ３’，退火溫度５９℃，產(chǎn)物１５７ｂｐ；ＧＡＰＤＨｓｅｎｓｅ ５’ＴＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＡ３’；ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５’ＡＧＡＴＣＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＡＣＡＴＴ３’，退火溫度５８℃，產(chǎn)物３０８ｂｐ。
１．３ 統計方法
　　應用ＳＡＳ軟件包，均數比較采用單因素方差分析。

２ 結果

２．１ 硒對高碘仔鼠血清和腦甲狀腺激素水平的影響見(jiàn)表１

　　由表１可以看出，與正常對照組相比，高碘對照組仔鼠血清和腦的ＴＴ４水平顯著(zhù)降低，ＴＴ３亦下降，而補硒可抑制ＴＴ４ 、ＴＴ３的降低。
２．２ 硒對高碘仔鼠腦ＭＢＰ ｍＲＮＡ的影響
　　由圖１和圖２可以看出，高碘組仔鼠腦ＭＢＰ ｍＲＮＡ 表達水平較正常對照組下降了２７％ 補硒組仔鼠腦ＭＢＰ ｍＲＮＡ 表達與正常對照組無(wú)顯著(zhù)性差異。

３ 討論

　　中樞神經(jīng)系統髓鞘是由蛋白質(zhì)占２０％～３０％和脂質(zhì)占７０％～８０％構成。髓鞘堿性蛋白ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＭＢＰ是主要蛋白質(zhì)，約占髓鞘蛋白質(zhì)總量的３０％。ＭＢＰ基因表達在髓鞘形成和腦分化發(fā)育過(guò)程中起著(zhù)重要作用。近年來(lái)大量研究資料表明，ＭＢＰ是反映中樞神經(jīng)系統有無(wú)實(shí)質(zhì)性損害，特別是有無(wú)髓鞘脫失的一個(gè)較特異的指標［８］。目前國內外未見(jiàn)有關(guān)高碘對仔鼠腦ＭＢＰ基因表達的影響及硒干預的研究報道。本實(shí)驗結果發(fā)現，高碘仔鼠腦ＭＢＰ ｍ ＲＮＡ 表達水平較對照組下降了２７％。
　　碘主要是通過(guò)合成的Ｔ３、Ｔ４起作用甲狀腺激素適時(shí)有效地調控某些基因的表達對于腦的正常發(fā)育是非常關(guān)鍵的。目前研究認為，ＭＢＰ啟動(dòng)子上存在Ｔ３反應元件，Ｔ３受體是在配體－非依賴(lài)狀態(tài)調控ＭＢＰ的基因表達。故Ｔ３可在轉錄水平對少突膠質(zhì)細胞的髓鞘結構蛋白基因進(jìn)行調節，從而調節中樞神經(jīng)系統髓鞘形成［９］。Ｂａｒｒａｄａｓ等研究表明，甲減新生大鼠腦中ＭＢＰ基因的表達明顯下降［１０］。本實(shí)驗觀(guān)察到，高碘組較對照組仔鼠血清和腦組織的ＴＴ４、ＴＴ３水平顯著(zhù)降低，由此提出，高碘引起仔鼠甲狀腺激素水平降低可能是引起仔鼠腦 ＭＢＰ ｍＲＮＡ 表達水平下降的原因。
　　關(guān)于高碘引起仔鼠甲狀腺激素變化的機理，國內外未見(jiàn)報道。但有資料表明，胎盤(pán)可以通過(guò)碘，早孕期胎兒的甲狀腺即具有濃集碘的功能，此時(shí)如果接觸１３１Ｉ，可影響胎兒甲狀腺發(fā)育，抑制甲狀腺激素的合成和釋放［１１］。此外，有資料表明，未控制的Ｇｒａｖｅ’ｓ病母親，由于體內甲狀腺激素過(guò)高，也可通過(guò)胎盤(pán)轉運引起新生兒暫時(shí)性垂體性甲低［１２］。本課題組給予親代鼠３０００μｇＬ的高碘飲水，發(fā)現親代鼠高碘組的尿碘水平及ＴＴ４顯著(zhù)高于正常對照組［１３］ 高碘和／或高甲狀腺激素可能通過(guò)胎盤(pán)影響仔鼠的甲狀腺功能，從而影響甲狀腺激素的合成和釋放。
　　作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和甲腺原氨酸脫碘酶的活性成分，硒對碘代謝和甲狀腺功能有著(zhù)重要影響。本課題組觀(guān)察到高碘母鼠肝臟硒含量顯著(zhù)降低，反應機體硒營(yíng)養狀況的敏感指標—ＧＳＨＰｘ活性也顯著(zhù)降低，肝臟５’ＤＩ活性亦下降［１４］ 提示機體嚴重缺硒［１５］，證實(shí)了吳泰相教授等提出的高碘甲腫機制的新假說(shuō)“脫碘酶障礙學(xué)說(shuō)”，即硒營(yíng)養缺乏或相對缺乏所造成的脫碘酶活性下降是高碘甲腫形成的主要原因。５’ＤＩ主要分布于肝、腎和甲狀腺，催化Ｔ４脫碘轉化為具有生物活性的Ｔ３，當硒營(yíng)養不足甚至缺乏時(shí)，肝、腎５’ＤＩ活性下降，將Ｔ４轉化成Ｔ３的能力降低，血中Ｔ３濃度下降，Ｔ４濃度上升［１６］。同時(shí)，本課題組觀(guān)察到高碘同時(shí)補硒組母鼠肝硒水平顯著(zhù)上升，含硒酶ＧＰｘ和５’ＤＩ活性升高至正常水平，激素水平趨于恢復正常。
　　綜上所述，高碘引起仔鼠甲狀腺激素水平降低可能是仔鼠腦 ＭＢＰ ｍＲＮＡ 表達水平下降的原因，硒可通過(guò)影響親代含硒酶的活性來(lái)調節甲狀腺激素水平從而上調仔鼠腦 ＭＢＰ ｍＲＮＡ 的表達。

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１４． Ｙａｎｇ Ｘｕｅｆｅｎｇ Ｈｏｕ Ｘｉａｏｈｕｉ Ｘｕｎ Ｘｉｏｕｆａ ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｉｏｄｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｍ ＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｅｉｏｄｉｎａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ． Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｄｉｓ ２００４ ３４６５－７２
１５． Ｂｅｒｍａｎｏ Ｇ Ｎｉｃｏｌ Ｆ Ｄｙｅｒ ＪＡ ｅｔ ａｌ． Ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｏｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｎ ｒａｔｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ １９９５ ３１１４２５－４３０．
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