周小建 王衛平 楊 毅(上海交通大學(xué)附屬第一人民醫院兒內科，上海 ２０００８０；復旦大學(xué)兒科醫院，上海 ２０００３２)
　　摘要: 目的 研究視黃酸調節胸腺細胞發(fā)育的作用及其機制。方法 采用體外胸腺組織培養體系，在培養中加入視黃酸或視黃酸受體拮抗劑。在培養的不同時(shí)間收集胸腺細胞，用熒光標記的抗ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８抗體染色，并進(jìn)行流式細胞儀分析，觀(guān)察胸腺細胞表面標志隨成熟分化的變化。胸腺細胞抽提的ＲＮＡ采用實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ法檢測視黃酸受體αＲＡＲα ｍＲＮＡ的表達。結果 體外胸腺組織培養體系能支持胸腺細胞的發(fā)育成熟。在培養２４ｈ視黃酸促進(jìn)未成熟的ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ４＋成熟細胞分化發(fā)育作用明顯，并且該作用可被ＲＡＲα特異性拮抗劑Ｒｏ４１５２５３所拮抗。另一方面，視黃酸能顯著(zhù)抑制ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ８＋細胞分化，這種作用也在培養２４ｈ出現。實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ結果顯示，視黃酸能促進(jìn)ＲＡＲα ｍＲＮＡ的表達，并且ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達水平與ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞百分數之間存在正相關(guān)ｒ＝０．５９３Ｐ＝０．０４２，與ＣＤ８＋胸腺細胞百分數之間存在負相關(guān)ｒ＝－０．６５４，Ｐ＝０．０２１。結論 視黃酸影響胸腺細胞的成熟分化，可能通過(guò)影響其受體ＲＡＲα表達的途徑而發(fā)揮調節作用。

Erpression of Retinoic Acid Receptor Genes in Children'sThumus
ZHOU Xiao-jian, YANG Yi, WANG Wei-ping

Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄＲＡ ｏｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＲＡ ｏｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ． Ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ／ｏｒ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ． Ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ａｔ ２４ ４８ ａｎｄ ７２ ｈｏｕｒｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉＣＤ３ ａｎｔｉＣＤ４ ａｎｔｉＣＤ８ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴＰＣＲ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α ＲＡＲα ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ａｂｌｅ ｔｏ ｓｕｐｐｏｒｔ ｔｈｅ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ． Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ＲＡ ｔｏ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｍｍａｔｕｒｅ ＣＤ４＋ＣＤ８＋ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｍａｔｕｒｅ ＣＤ４＋ ｃｅｌｌｓ ｂｕｔ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｍｍａｔｕｒｅ ＣＤ４＋ＣＤ８＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ ｍａｔｕｒｅ ＣＤ８＋ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｍａｒｋｅｄ ａｔ ２４ｈ ａｎｄ ｗａｓ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｄ ｂｙ Ｒｏ４１５２５３． ＲＡ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＲα ｍＲＮＡ ｉｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ． Ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＲα ｍＲＮＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ４＋ＣＤ８＋ ｃｅｌｌｓ ｒ＝０．５９３ Ｐ＝０．０４２． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＲα ｍＲＮＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ８＋ ｃｅｌｌｓ ｒ＝－０．６５４，Ｐ＝０．０２１ ｂｙ ＲＡ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＲＡ ｌｉｋｅｌｙ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｐｅｒｈａｐｓ ｂｙ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＲα ｇｅｎｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｒｅｔｉｎｏｌ；Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ
　　胸腺是Ｔ淋巴細胞發(fā)育的重要場(chǎng)所，骨髓中的造血干細胞分化為共同淋巴樣前體細胞ｃｏｍｍｏｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ，ＣＬＰ后進(jìn)入胸腺，在胸腺微環(huán)境的作用下進(jìn)一步發(fā)育為Ｔ淋巴細胞，Ｔ淋巴細胞在離開(kāi)胸腺之前又稱(chēng)為胸腺細胞。Ｔ細胞在胸腺內的發(fā)育是胸腺細胞與胸腺微環(huán)境相互作用的結果，胸腺基質(zhì)細胞通過(guò)分泌細胞因子，影響胸腺細胞的發(fā)育。視黃酸ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ＲＡ是維生素Ａ代謝的主要活性產(chǎn)物，通過(guò)與視黃酸受體ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒＲＡＲ結合，在脊椎動(dòng)物發(fā)育、胚胎形成、細胞分化中發(fā)揮重要作用。研究證實(shí)視黃酸對免疫功能具有重要的調節作用，但對免疫細胞成熟發(fā)育的影響及其作用機理尚有待進(jìn)一步研究。本研究通過(guò)觀(guān)察人胸腺細胞發(fā)育過(guò)程中細胞成熟分化表面標志的變化及其與ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達水平的相互關(guān)系，探討ＲＡ影響胸腺細胞發(fā)育的作用及機制。

1 材料與方法
　　標本來(lái)源 胸腺組織來(lái)源于我院先天性心臟病兒童在進(jìn)行心臟修補手術(shù)時(shí)為暴露手術(shù)視野切除之部分胸腺，所有兒童均為單純房缺或室缺，心功能和營(yíng)養發(fā)育良好，其母懷孕期間無(wú)維生素缺乏病史。在取標本期間未接受任何影響免疫功能的治療，如放射，激素，及免疫抑制治療等。
　　主要試劑 全反式視黃酸ａｔＲＡ購自Ｓｉｇｍａ公司。ＲＡＲα受體特異性拮抗劑Ｒｏ４１５２５３由Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌｔｄ．Ｂａｓｌｅ Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ公司惠贈，以上試劑均溶于ＤＭＳＯ中，配成１０ｍｍｏｌＬ儲存液，置Ｎ２中－２０°Ｃ避光保存。用于流式細胞儀檢測的熒光標記的抗ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８單抗均購自ＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ公司。ＲＮＡ抽提與逆轉錄試劑購自ＧＩＢＣＯ公司。培養液：ＲＰＭＩ １６４０培養液含２ｍｍｏｌＬ谷氨酰胺購自 ＧＩＢＣＯ，含１５％ ５６℃滅活的小牛血清，１００Ｕｍｌ青霉素，１００μｇｍｌ鏈霉素，１ｍｍｏｌＬ丙酮酸鈉。并按實(shí)驗設計加入生理濃度的ａｔＲＡ １０６ｍｏｌＬ，Ｒｏ４１５２５３ １０５ ｍｏｌＬ４。
　　胸腺標本采集與細胞懸液的制備 將手術(shù)切除的部分胸腺立即置冷ＲＰＭＩ １６４０培養液中剪碎，采用Ｆｉｃｏｌｌ法分離胸腺細胞并制成細胞懸液，調成１×１０６·ｍｌ－１備用。采用臺盼藍攝入法檢測細胞活力，至少９５％以上的細胞臺盼藍染色陰性。
　　胸腺組織培養 參照文獻５，在直徑為６ｃｍ的培養皿中放入明膠海綿，并在其上置孔徑為０．８μｍ的微孔濾膜，并將大小約１ｍｍ３的胸腺組織置濾膜上。并按加入的培養液的不同分為空白對照組ｃｏｎｔｒｏｌ Ｃ、視黃酸組ＲＡ、ＲＡ＋Ｒｏ４１－５２５３組ＡＯ組，置３７℃、５％ＣＯ２培養箱中，各組均分別培養２４、４８、７２ｈ并在各時(shí)間點(diǎn)分離收集胸腺細胞，制成細胞懸液。
　　細胞表面標志分析 取胸腺細胞懸液１００μｌ，加熒光標記的抗ＣＤ４、ＣＤ８單克隆抗體染色后，并同時(shí)用熒光標記的抗ＣＤ３單克隆抗體染色作為分選指標，用流式細胞儀ＦＡＣＳｃａｎ ＢＤ公司分析結果。
　　總ＲＮＡ抽提及逆轉錄ＰＣＲＲｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲ ＲＴ－ＰＣＲ 取各時(shí)間點(diǎn)胸腺細胞，采用 ＴＲＩｚｏｌ抽提總ＲＮＡ，操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。抽提的總ＲＮＡ用ＭＭＬＶＭｏｌｏｎｅｙ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉｎ ｖｉｒｕｓ，莫洛尼鼠白血病病毒逆轉錄酶，將ＲＮＡ逆轉錄合成ｃＤＮＡ。采用陽(yáng)性特異性擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化和測定ＯＤ２６０值準確定量后，１０的倍比稀釋 １０６～１０１０拷貝數５０ｎｇ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ 制備標準曲線(xiàn)，加入ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ ｄｙｅＲｏｃｈｅ熒光染料，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ擴增，每一樣本的拷貝數采用ＡＢＩ７０００實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ提供的分析軟件，將樣本的Ｃｔ值與標準曲線(xiàn)比較而得到其拷貝數。視黃酸受體基因ＲＡＲα的引物采用Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５軟件設計，由賽百盛生物技術(shù)公司合成，上游引物序列為５’ＣＴＧＴＧＡＧＡＡＡＣＧＡＣＣＧＡＡＡＣ３’下游引物序列為５’ＴＴＧＴＣＣＣＡＧＡＧＧＴＣＡＡＴＧＴＣ３’產(chǎn)物片段長(cháng)度為２１１ｂｐ。
　　 數據處理 應用ＳＰＳＳ統計軟件進(jìn)行處理。采用雙因素方差分析，并進(jìn)行相關(guān)分析。 以均數±標準差Ｘ±ｓ表示，Ｐ＜０．０５為差異有顯著(zhù)性。

２ 結 果

　　視黃酸對胸腺細胞發(fā)育的影響 實(shí)驗中所采用的溶劑是０．１％的ＤＭＳＯ，在預試驗中，我們采用臺盼藍染色，觀(guān)察了ＤＭＳＯ對胸腺細胞存活率的影響，結果表明，該濃度的ＤＭＳＯ與正常空白　　對照組相比差異無(wú)顯著(zhù)性。這表明微量的ＤＭＳＯ對體外培養體系中的胸腺細胞發(fā)育無(wú)影響。
流式細胞儀的分析結果顯示對照組胸腺細胞在體外胸腺組織培養條件下可逐漸發(fā)育成熟，主要表現為，ＣＤ４＋ＣＤ８＋的未成熟胸腺細胞在培養過(guò)程中逐漸下降，而ＣＤ８＋成熟胸腺細胞升高，以培養２４ｈ為顯著(zhù)。這表明體外胸腺組織培養體系能維持胸腺細胞的發(fā)育，胸腺細胞的發(fā)育須胸腺基質(zhì)內環(huán)境的支持，體外培養條件下，胸腺基質(zhì)細胞可能通過(guò)分泌細胞因子促進(jìn)胸腺細胞成熟。
　　ＲＡ組ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞在培養２４ｈ并無(wú)明顯下降，在培養４８ｈ后才開(kāi)始下降圖１，而ＣＤ８＋細胞雖有所增加，但仍低于對照組Ｐ＜０．０５加入ＲＡＲα受體特異性拮抗劑Ｒｏ４１５２５３在培養２４ｈ ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞即下降，與ＲＡ組差異有顯著(zhù)性Ｐ＜０．０５，提示ＲＡ阻抑ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ８＋細胞的分化，而該作用可被ＲＡＲα受體特異性拮抗劑抵銷(xiāo)圖２。

　　體外培養加入ＲＡ ２４ｈ，ＣＤ４＋胸腺細胞明顯增加，與對照組相比差異顯著(zhù)Ｐ＜０．０５；這種作用在加入Ｒｏ４１５２５３后則與同時(shí)間點(diǎn)空白對照無(wú)差異圖３。這表明ＲＡ促進(jìn)ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ４＋細胞的分化。

　　２．２ 胸腺細胞體外培養過(guò)程中ＲＡＲα ｍＲＮＡ的表達變化　在體外培養過(guò)程中，對照組ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達逐漸下降，這種趨勢與體外培養體系ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞的成熟分化呈正相關(guān)變化ｒ＝０．５９３，Ｐ＝０．０４２。加入ＲＡ后ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達在培養４８ｈ仍維持較高水平，與同一時(shí)間點(diǎn)對照組相比差異有顯著(zhù)性Ｐ＜０．０５；但與ＣＤ８＋胸腺細胞百分數成負相關(guān)ｒ＝－０．６５４，Ｐ＝０．０２１。加入Ｒｏ４１５２５３后ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達下降。

　　視黃酸具有廣泛的生物學(xué)效應，研究表明，視黃酸通過(guò)與視黃酸受體結合而發(fā)揮作用。視黃酸受體基因表達的多樣性及復雜性是視黃酸介導廣泛生物學(xué)效應的分子基礎６。本研究證實(shí)，胸腺細胞在分化發(fā)育的各個(gè)階段均表達ＲＡＲα ｍＲＮＡ。
　　我們結果表明，在體外培養的２４～４８ｈ，視黃酸能促進(jìn)胸腺細胞向ＣＤ４＋胸腺細胞分化，這種作用在培養２４ｈ尤為明顯；另一方面，ＲＡ顯著(zhù)抑制胸腺細胞向ＣＤ８＋胸腺細胞分化，這種變化與視黃酸對ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達的影響相一致，并且在加入ＲＡＲα特異性拮抗劑Ｒｏ４１５２５３后能抵消上述作用，這表明，ＲＡ是通過(guò)與ＲＡＲα結合而發(fā)揮調控胸腺細胞發(fā)育的作用。　　既往研究認為７，ＲＡＲα主要在胸腺細胞發(fā)育的ＣＤ４＋ＣＤ８＋階段表達，我們通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ法測定不同時(shí)間點(diǎn)ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達的變化，結果發(fā)現，體外培養過(guò)程中ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達逐漸下降，這與ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞的下降相一致，這提示ＣＤ４＋ＣＤ８＋細胞可能是ＲＡ作用的主要靶細胞。因此，我們認為，通過(guò)影響ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞ＲＡＲα ｍＲＮＡ的表達，可能對調節ＣＤ４＋ＣＤ８＋細胞的分化具有重要作用。

　　本研究還發(fā)現，加入ＲＡ后ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞與對照組相比顯著(zhù)升高，這表明ＲＡ能抑制ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞的分化成熟，但此時(shí)ＣＤ４－ＣＤ８－胸腺細胞并無(wú)明顯變化，ＣＤ４＋胸腺細胞升高，故我們認為，這種作用主要是抑制了ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ８＋胸腺細胞分化。可見(jiàn)，ＲＡ一方面促進(jìn)ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞向ＣＤ４＋胸腺細胞分化；另一方面，又抑制其向ＣＤ８＋胸腺細胞分化，ＲＡ對不同分化階段胸腺細胞的作用的不同可能源于其ＲＡＲα ｍＲＮＡ表達的差異。
　　研究證實(shí)，ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞表達ＣＤ４及ＣＤ８協(xié)同受體分子，是一種未成熟的雙向的前體細胞，具有向ＣＤ４＋ＣＤ８－或ＣＤ８＋ＣＤ４－單陽(yáng)性成熟Ｔ細胞分化的能力，這主要取決于ＴＣＲＴ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｔ細胞受體的ＭＨＣｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ，主要組織相容性復合物特異性， ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞表達ＭＨＣＩＩ類(lèi)特異性ＴＣＲ則分化為ＣＤ４＋胸腺細胞，若表達ＭＨＣＩ類(lèi)特異性ＴＣＲ則分化為ＣＤ８＋胸腺細胞８。Ｙａｇｉ等７研究發(fā)現ＲＡ顯著(zhù)抑制ＣＤ４－ＣＤ８－胸腺細胞及ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞的ＣＤ３及ＴＣＲ基因表達的上調，因此，我們推測，ＲＡ可能通過(guò)其受體途徑影響ＴＣＲ、ＭＨＣ基因的表達從而影響Ｔ淋巴細胞發(fā)育。另一方面，有研究認為，胸腺早期發(fā)育過(guò)程中表達的一些細胞因子或某些蛋白可影響ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺細胞分化９１０。因此，ＲＡ是否通過(guò)其受體途徑影響這些細胞因子或蛋白的表達，從而間接調控Ｔ細胞發(fā)育尚需進(jìn)一步研究。
　　本研究主要觀(guān)察ＲＡＲα途徑的活化與阻抑對胸腺細胞成熟的作用。由于視黃酸受體尚有其它的亞型，研究表明，不同的視黃酸受體亞型具有不同的生理功能，胸腺細胞在發(fā)育過(guò)程中還表達ＲＡＲγ、ＲＸＲα等。Ｓｚｏｎｄｙ等１１認為ＲＡＲα的表達與活化能抑制胸腺細胞凋亡，而ＲＡＲγ途徑則誘導胸腺細胞凋亡。該研究認為，生理濃度的全反式視黃酸ａｔＲＡ并不影響活化誘導的胸腺細胞凋亡，這是由于ＲＡＲα與ＲＡＲγ處于相對平衡，若增加ａｔＲＡ濃度，使其在體內轉化為９順式視黃酸，則激活ＲＸＲｓ，加強了ＲＡＲα的抑制作用，抵消ＲＡＲγ介導的促凋亡作用。這表明，通過(guò)精確調節ＲＡＲｓ表達，導致ＲＡＲαＲＡＲγ表達比值的變化可影響細胞的發(fā)育。因此，進(jìn)一步對其它視黃酸受體的深入研究，有利于我們理解視黃酸調控胸腺細胞發(fā)育的確切機制。
　　總之，ＲＡ對胸腺細胞發(fā)育具有重要的調節作用， ＲＡＲα特異性拮抗劑Ｒｏ４１５２５３能拮抗這種作用，提示ＲＡ可能通過(guò)ＲＡＲα途徑發(fā)揮調節胸腺細胞發(fā)育的作用。由于Ｔ細胞在細胞免疫以及活化輔助Ｂ細胞產(chǎn)生抗體的過(guò)程中均發(fā)揮重要作用，本研究顯示，視黃酸受體α途徑的活化在促進(jìn)ＣＤ４＋細胞的發(fā)育中起重要作用，這為臨床合理使用維生素Ａ制劑增強兒童免疫功能提供了理論依據。

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　　９． Ｂｒｕｇｎｅｒａ Ｅ Ｂｈａｎｄｏｏｌａ Ａ Ｃｉｂｏｔｔｉ Ｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｒｅｖｅｒｓａｌ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｓｉｇｎａｌｅｄ ＣＤ４＋８＋ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｔｅｒｍｉｎａｔｅ ＣＤ８ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｅｖｅｎ ｗｈｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｉｎｔｏ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０００ １３５９－７１
　　１０． Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＡＣ Ｒｏｂｅｙ ＥＡ Ｈｕａｎｇ ＹＨ． Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ ２００１ １１５５４－５６０．
　　１１． Ｓｚｏｎｄｙ Ｚ Ｒｅｉｃｈｅｒｔ Ｕ Ｂｅｒｎａｒｄｏｎ ＪＭ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ａｌｌｔｒａｎｓ ａｎｄ ９ｃｉｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖｉａ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ １９９８ ３３１７６７－７７４．