ＹｕＮｉ Ｌａｉ ＭＳ ＳｕｎｇＬｉｎｇ Ｙｅｈ ＰｈＤ ＭｉｎｇＴｓａｎ ＬｉｎＭＤ ｅｔ ａｌ 劉艷妮 王 勁譯
１ 前言
　　敗血癥是臨床上常見(jiàn)的大手術(shù)病人的術(shù)后并發(fā)癥。敗血癥時(shí)，機體受到細菌毒素侵襲，可能會(huì )發(fā)生深部組織的破壞和代謝底物的改變。全腸外營(yíng)養（ｔｏｔａｌ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ＴＰＮ）的發(fā)展為那些不宜經(jīng)胃腸道進(jìn)食的患者提供了攝取足夠的熱量和蛋白質(zhì)的途徑。然而，有證據顯示ＴＰＮ可導致腸萎縮和腸道淋巴組織（ｇｕｔａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ，ＧＡＬＴ）損傷。小腸ＧＡＬＴ為所有的腸粘膜部位提供初級免疫保護。因為粘膜免疫一般由ＧＡＬＴ中的Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑產(chǎn)生，由其處理腸道內抗原物質(zhì)，并激發(fā)產(chǎn)生相應的原初Ｂ細胞和Ｔ細胞，因此Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑受到特別的關(guān)注。研究顯示當進(jìn)行ＴＰＮ治療時(shí)Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑內的Ｂ細胞和Ｔ細胞群數量明顯減少。而且經(jīng)靜脈營(yíng)養的動(dòng)物，其白介素４（ＩＬ４）和白介素１０（ＩＬ１０）及ＩｇＡ水平下降。臨床上認為對危重患者，腸內營(yíng)養途徑好于腸外營(yíng)養補給途徑。但同時(shí)也發(fā)現敗血癥會(huì )減少腸系膜血流量，并對小腸的屏障功能和代謝功能造成不良影響。Ｇａｒｄｉｎｅｒ等認為存在腸源性敗血癥的情況下，腸外營(yíng)養較腸內營(yíng)養更有益于提高大鼠的生存率。
　　谷氨酰胺（Ｇｌｎ）是人體的半必需氨基酸，且表明其對機體有多種有益的功能。Ｉｎｏｕｅ等對腹膜炎模型的研究發(fā)現，靜脈輸注Ｇｌｎ治療組的腸重量及腸粘膜上的雙糖酶活性均高于對照組。Ｎａｋａ等研究分析了靜脈內輸注Ｇｌｎ二肽對敗血癥死亡率的影響，發(fā)現給以ＧｌｎＴＰＮ組動(dòng)物的死亡率顯著(zhù)低于接受常規ＴＰＮ組動(dòng)物。Ｇｌｎ對機體的有益作用被認為是由于其對增加腸血流量及維持腸屏障功能的保護效應。臨床研究也表明Ｇｌｎ治療組患者罹受的臨床感染更少和住院時(shí)間更短。一些研究者提出Ｇｌｎ可能對于治療常規的感染和炎癥有用。據我們所知，還沒(méi)有Ｇｌｎ對感染和敗血癥后ＧＡＬＴ功能影響的研究。因此，我們研究了在敗血癥病發(fā)前補充Ｇｌｎ膳食和病發(fā)后給以富含Ｇｌｎ的ＴＰＮ，或者二者聯(lián)合使用對Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑功能及其分泌ＩｇＡ的影響。由于應用盲腸結扎和穿刺（ＣＬＰ）復制大鼠的腸源性敗血癥模型較為簡(jiǎn)便且更具臨床相關(guān)性，故在本次研究中，我們應用了ＣＬＰ建立敗血癥疾病模型。

２ 材料和方法

２．１ 動(dòng)物
　　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，體重２３０～２５０ｇ，以不銹鋼籠飼養于溫濕度可控房間，１２ｈ１２ｈ光照／黑暗循環(huán)；實(shí)驗前３ｄ動(dòng)物自由進(jìn)食標準大鼠飼料。
　　本研究中所有程序均遵循國立臺灣大學(xué)動(dòng)物管理委員會(huì )（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｉｗａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）的有關(guān)規定。
２．２ 分組及手術(shù)步驟
　　所有大鼠被分為１個(gè)對照組和４個(gè)實(shí)驗組。對照組、實(shí)驗１組和實(shí)驗２組給以半精制飼料；而實(shí)驗３組和實(shí)驗４組給予上述相同飼料，但其中２５％的總氨基酸氮用Ｇｌｎ取代部分酪蛋白（見(jiàn)表１）。在分別給以大鼠上述飼料飼養１０ｄ后，實(shí)驗組動(dòng)物的敗血癥采用ＣＬＰ誘導形成，而對照組動(dòng)物采用假手術(shù)誘導。ＣＬＰ參照Ｗｉｃｈｔｅｒｍａｎ等的方法。即，腹腔注射戊巴比妥（５０ｍｇｋｇ）麻醉大鼠，經(jīng)腹中線(xiàn)切口打開(kāi)腹腔。分離盲腸，以３～０絲質(zhì)繃帶覆蓋纏繞至恰好低于回盲瓣部后，用１８號針穿刺盲腸兩次后將其復位，腹部傷口用兩層紗布覆蓋。所有動(dòng)物經(jīng)ＣＬＰ或假手術(shù)后立即插管進(jìn)行ＴＰＮ。硅導管（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ，ＵＳＡ）從右頸靜脈插入，導管末端穿過(guò)皮下到達頸后經(jīng)螺形彈簧穿出，連在一個(gè)旋軸上以利于動(dòng)物在各自的代謝籠內自由活動(dòng)。第１天ＴＰＮ速度以２ｍｌｈ進(jìn)行，此后ＴＰＮ速度以全速進(jìn)行，灌輸速度由Ｔｅｒｕｆｕｓｉｏｎ泵（ｍｏｄｅｌ ＳＴＣ５０３，Ｔｅｒｕｍｏ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）調控。　　無(wú)脂肪ＴＰＮ液在層流櫥內制備，每日在使用前向ＴＰＮ液內添加滅菌脂肪乳。室溫下全天灌輸ＴＰＮ液。所有大鼠用ＴＰＮ維持３ｄ，期間不給任何腸內營(yíng)養。對照組和實(shí)驗１組、３組給以常規ＴＰＮ，實(shí)驗２組和４組補充Ｇｌｎ，以Ｇｌｎ提供ＴＰＮ液里２５％的氨基總氮。ＴＰＮ供給２８０ｋｃａｌｋｇ．Ｂｗ，千卡∶氮＝１２０∶１。除氨基酸含量外ＴＰＮ液里含氮量和營(yíng)養素組成相同（見(jiàn)表２）。本研究共有５組大鼠：對照組，假手術(shù)前后均不補充Ｇｌｎ；實(shí)驗１組，ＣＬＰ前后不補充Ｇｌｎ（－－）；實(shí)驗２組，ＣＬＰ前飼以半精制飼料，ＣＬＰ后給以含Ｇｌｎ的ＴＰＮ液（－＋）；實(shí)驗３組，ＣＬＰ前以補充Ｇｌｎ的飼料，術(shù)后給以常規ＴＰＮ（＋－）；實(shí)驗４組，術(shù)前以補充Ｇｌｎ的飼料，術(shù)后給含Ｇｌｎ的ＴＰＮ液（＋＋）。

２．３ 血漿Ｇｌｎ水平分析
　　持續ＴＰＮ輸液直到動(dòng)物死亡。所有大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈放血處死。血標本以含肝素試管收集并立即離心分離。血漿在用５％水楊酸去蛋白質(zhì)后以標準茚三酮方法（Ｍｏｄｅｌ ６３００，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）分析測定血漿氨基酸含量。
２．４ Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑中淋巴細胞的分離
　　假手術(shù)或ＣＬＰ３ｄ后，所有存活大鼠〔對照組（存活數實(shí)驗前總數）：９９；－－：１１１７；－＋：９１３；＋－：９１４；＋＋：１１１６〕稱(chēng)重后腹腔注射戊巴比妥麻醉。４個(gè)實(shí)驗組的存活大鼠無(wú)差別。經(jīng)腹中線(xiàn)切口，仔細翻動(dòng)每只大鼠的十二指腸至回腸末端部分，計數小腸上的Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑個(gè)數，Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑內淋巴細胞的分離參照文獻所述１。　　即從小腸漿膜部切離Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑并用１８號針將其挑破，碎片用含５０Ｕｍｌ的Ⅰ型膠原酶（Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）并加入１００μｇｍｌ的青霉素和鏈霉素的ＲＰＭＩ１６４０，３７℃溫孵恒溫振蕩６０ｍｉｎ處理。經(jīng)膠原酶消化后，懸浮細胞經(jīng)尼龍膜過(guò)濾并用Ｈａｎｋ’ｓ平衡鹽液沖洗３遍。細胞數目校正到２×１０６ｍｌ，并懸浮于含１０％胎牛血清，２ｍＭ的Ｇｌｎ和抗生素的ＲＰＭＩ１６４０中。
２．５ 細胞因子免疫測定
　　以植物血細胞凝集素（２００ｎｇｍｌ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ；Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）來(lái)激發(fā)培養的Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑中的淋巴細胞產(chǎn)生細胞因子。淋巴細胞（２×１０６ｍｌ ｉｎ ＲＰＭＩ１６４０）和促有絲分裂劑共同接種于３層９６孔板微量滴定盤(pán)中。對照孔加入等體積的培養液。在ＣＯ２培養箱中與植物血凝素在３７℃下孵育２４ｈ，將上清液離心后保存于－７０℃待測細胞因子。用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）測定Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑中淋巴細胞上清液的ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ１０及ＩＦＮγ的含量。
２．６ 淋巴細胞亞群分布
　　將１０５ｃｅｌｌｓ懸浮于含與熒光素結合的小鼠抗－大鼠ＣＤ３Ｓｅｒｏｔｅｃ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ和與藻紅蛋白結合的小鼠抗大鼠ＣＤ４５ＲａＳｅｒｏｔｅｃ的１００μｌ Ｈａｎｋ’ｓ平衡鹽溶液中，分別鑒定分離于Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑的Ｂ淋巴細胞和Ｔ淋巴細胞的表型。結合熒光素的小鼠抗－大鼠ＣＤ８和結合藻紅蛋白的小鼠抗大鼠ＣＤ４分別用來(lái)鑒定Ｔｈ細胞和細胞毒性Ｔ細胞。染色１５ｍｉｎ后，加入１ｍｌ紅細胞溶解緩沖液（Ｓｅｒｏｔｅｃ）以溶解紅細胞和固定染色的淋巴細胞。收集５×１０４個(gè)存活細胞的熒光數據，并用流式細胞儀分析（Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ，ＵＳＡ）。
２．７ 抗體定量分析
　　測定血漿及小腸沖洗液的ＩｇＡ水平。小腸沖洗液的收集步驟參考文獻所述并加以修改〔２〕。分離去除Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑后，截取靠近盲腸１２ｃｍ長(cháng)的一段小腸，用５ｍｌ含１％蛋白酶抑制劑（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）的磷酸緩沖液沖洗腸腔。３０００ｒｐｍ離心小腸沖洗液１０ｍｉｎ以去除碎片，收集上清液、適度稀釋后檢測ＩｇＡ水平。血漿和小腸ＩｇＡ水平采用夾心型酶聯(lián)免疫吸附法測定，此方法中，與抗大鼠ＩｇＡ結合的抗體（ｃｏｌｏｎ Ａ９３３；ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）固定于盤(pán)上，用過(guò)氧化物酶標記的抗人ＩｇＡ檢測抗體（ｃｏｌｏｎ Ａ９３２；ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）檢測抗體。小腸沖洗液中的ＩｇＡ水平以ｍｇｍｌ表示。
２．８ 統計分析
　　所得實(shí)驗數據以均數±標準差表示。組間差異分析采用兩因素方差分析及Ｆｉｓｈｅｒ檢驗。Ｐ＜０．０５為檢驗水準。

３． 結果
① 體重和血漿Ｇｌｎ水平
　　５組動(dòng)物的初始體重、飼喂實(shí)驗性飲食１０ｄ后及進(jìn)行ＴＰＮ ３ｄ后的體重（數據未列出）不存在組間差異。Ｇｌｎ補充組（實(shí)驗組２、３和４）的血漿Ｇｌｎ水平明顯高于組１，但與對照組比較無(wú)顯著(zhù)性差異。
② 總Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑淋巴細胞產(chǎn)量
　　實(shí)驗４組大鼠（＋＋）小腸上總Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑數目顯著(zhù)高于對照組和實(shí)驗１組（－－），實(shí)驗２組（－＋）和實(shí)驗３組（＋－）則差異不顯著(zhù)。Ｇｌｎ補充組大鼠的總Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑淋巴細胞數量明顯高于對照組，而實(shí)驗１組和對照組間卻未觀(guān)察到明顯差異（見(jiàn)圖２Ｂ）。
③ 淋巴細胞亞群
　　５組動(dòng)物Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑中的ＣＤ４５Ｒａ＋和ＣＤ８＋淋巴細胞數量無(wú)明顯差別。實(shí)驗１組（－－）動(dòng)物的ＣＤ３＋和ＣＤ４＋細胞數量明顯低于對照組，而Ｇｌｎ補充組與對照組間未觀(guān)察到差異。
④ 血漿和小腸ＩｇＡ水平
　　Ｇｌｎ補充組的血漿ＩｇＡ水平明顯高于對照組和實(shí)驗１組（－－）。實(shí)驗２組（－＋）和實(shí)驗４組（＋＋）動(dòng)物小腸沖洗液中的ＩｇＡ水平明顯高于對照組和實(shí)驗１組（－－）。
⑤ 體內細胞因子分泌量
　　實(shí)驗組動(dòng)物的激發(fā)Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑淋巴細胞分泌ＩＬ１０量顯著(zhù)低于對照組。ＩＦＮγ水平未見(jiàn)組間差別，而ＩＬ２和ＩＬ４則未能測出。

４ 討論
　　體內和體外研究均表明補充Ｇｌｎ能夠改善免疫應答。這些效果的臨床意義已為一些動(dòng)物和人體實(shí)驗資料證實(shí)。由于Ｇｌｎ提供２５％的氨基總氮有助于促進(jìn)鼠科動(dòng)物的免疫應答，故在本研究中我們采用了這個(gè)用量。我們在ＣＬＰ后對大鼠進(jìn)行３ｄ天的ＴＰＮ，是由于預實(shí)驗發(fā)現在ＣＬＰ的第３天小腸漿膜部Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑的總數目比其它時(shí)候都要多。本研究未發(fā)現ＣＬＰ后補充Ｇｌｎ有利于提高動(dòng)物的存活率。我們僅記錄３ｄ的存活動(dòng)物數，因此長(cháng)期補充是否有助于提高動(dòng)物的存活率有待深入研究。
　　Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑是胃腸道中被特化的淋巴濾泡集結。原初淋巴細胞在Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑中被激活，在腸系膜淋巴結中增生后經(jīng)由胸腺導管遷移到不同粘膜部位的固有層中，并產(chǎn)生分泌型ＩｇＡ。　　本研究中我們發(fā)現Ｇｌｎ補充組的總Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑淋巴細胞產(chǎn)量明顯高于對照組，而在對照組和實(shí)驗１組之間則未觀(guān)察到有差異。結果表明ＣＬＰ后補充Ｇｌｎ能夠促進(jìn)ＧＡＬＴ中淋巴細胞增生，ＧＡＬＴ中總淋巴細胞數量增多。為了解Ｇｌｎ對Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑內總Ｂ淋巴細胞（ＣＤ４５Ｒａ＋）、總Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｔｈ細胞（ＣＤ４＋）和細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）分布的影響，我們分別對各類(lèi)淋巴細胞計數。結果顯示位于Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑的Ｂ細胞和細胞毒性Ｔ細胞組間無(wú)顯著(zhù)性差異。而實(shí)驗１組的ＣＤ３＋和ＣＤ４＋則顯著(zhù)低于對照組，而在Ｇｌｎ補充組和對照組之間則未觀(guān)察到明顯差異。結果說(shuō)明ＣＬＰ前和或ＣＬＰ后給以Ｇｌｎ有助于維持敗血癥狀態(tài)下Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑內的總Ｔｌ和Ｔｈ淋巴細胞群。這個(gè)結果類(lèi)似于Ａｌｖｅｒｄｙ等的報道，即向標準ＴＰＮ液加入Ｇｌｎ有助于維持腸粘膜固有層中的ＣＤ４＋細胞水平類(lèi)似于經(jīng)口喂養飼料的動(dòng)物。　　分泌型ＩｇＡ是機體對抗侵襲性病原體的特異性免疫的主要效應因子。本實(shí)驗中，我們發(fā)現實(shí)驗２組（－＋）和４組（＋＋）的血漿及小腸ＩｇＡ水平明顯高于未補充Ｇｌｎ組。還發(fā)現實(shí)驗３組（＋－）的血漿ＩｇＡ濃度高于實(shí)驗１組和對照組。這些結果說(shuō)明在ＣＬＰ前和／或ＣＬＰ后給以Ｇｌｎ能促進(jìn)ＩｇＡ的分泌。各Ｇｌｎ補充組動(dòng)物的Ｐｅｙｅｒ＇ｓ斑內的淋巴細胞產(chǎn)量、淋巴細胞亞群分布以及ＩｇＡ分泌量組間未見(jiàn)有顯著(zhù)性差異，因此ＣＬＰ前和ＣＬＰ后給予Ｇｌｎ似乎對提高腸粘膜免疫功能無(wú)協(xié)同作用。
　　細胞因子是免疫系統細胞產(chǎn)生的多肽類(lèi)物質(zhì)，是作為免疫應答和組織受損反應的調節因子。為了解細胞因子的分泌對小腸免疫機能的可能作用，我們測定了有絲分裂原刺激的Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑淋巴細胞培養組織中ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ１０和ＩＦＮγ的產(chǎn)生水平。ＩＬ２和ＩＦＮγ由Ｔｈｃｅｌｌ產(chǎn)生。Ｔｈ１細胞因子增強細胞免疫。Ｔｈ１細胞的主要效應是活化Ｔｃｅｌｌ。Ｔｈ２細胞因子包括ＩＬ４和ＩＬ１０增強體液免疫。Ｔｈ２細胞的主要效應是活化Ｂｃｅｌｌ和上調抗體的產(chǎn)生。Ｔｈ１和Ｔｈ２淋巴細胞的效應呈反向調節。Ｋｕｄｓｋ等報道富含Ｇｌｎ的ＴＰＮ能校正小腸ＩＬ４和ＩＬ１０的產(chǎn)生，因而能夠維持小腸的ＩｇＡ水平。我們對體外Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑產(chǎn)生的細胞因子作分析后發(fā)現，ＩＬ２、ＩＬ４和ＩＦＮγ無(wú)法檢測或經(jīng)有絲分裂原刺激后５組間不存在組間差異。４個(gè)實(shí)驗組動(dòng)物ＩＬ１０的產(chǎn)量無(wú)組間差異，但均低于對照組。本實(shí)驗中未觀(guān)察到小腸ＩｇＡ和體外Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑ＩＬ４和ＩＬ１０產(chǎn)量之間具可比性改變的數據。可能的原因是ＩＬ４或ＩＬ１０活性的峰值時(shí)間出現在我們測定之前，或者是這些細胞因子的生物活性水平正好低于現有免疫測定方法的檢測范圍。目前我們實(shí)驗室正在對脾臟和Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑細胞因子的ｍＲＮＡ表達進(jìn)行定量分析研究。
　　總之，本研究的結果表明從預防性使用補充Ｇｌｎ的腸內膳食和ＣＬＰ后靜脈輸注Ｇｌｎ均可促進(jìn)敗血癥大鼠ＧＡＬＴ的總淋巴細胞的增生、增強ＩｇＡ的分泌及維持Ｐｅｙｅｒ’ｓ斑Ｔ淋巴細胞群和血漿Ｇｌｎ水平。ＣＬＰ前和ＣＬＰ后使用Ｇｌｎ似乎對增強腸源性敗血癥大鼠腸粘膜免疫功能無(wú)協(xié)同作用。

部分參考文獻：
　　１． Ｊａｎｕ Ｐ Ｌｉ Ｊ Ｒｅｎｅｇａｒ ＫＢ Ｋｕｄｓｋ ＫＡ． Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｇｕｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｕｐｐｅｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ． Ａｎｎ Ｓｕｒｇ，１９９２，２２５ ７０７－７１５．
　　２． Ｐｅｒｄｉｇｏｎ Ｇ Ａｌｖａｒｅｚ Ｓ Ｐｅｓｃｅ ｄｅ Ｒｕｉｚ Ｈｏｌｇａｄｏ Ａ． Ｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｏｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｏｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ． Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓ １９９１ ５８ ４８５－４９６．
　　譯自：Ｎｕｔｒｔｉｏｎ ２００４ ２０３２８６－２９１