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達能營(yíng)養中心第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì )論文集

華煒
(浙江省疾病預防控制中心毒理檢驗所,杭州,310009)

摘要:目的探討茶蛋白的降血脂及抗氧化作用。方法觀(guān)察不同劑量的茶蛋白對高脂大鼠血清TG、TC、HDL-C及衰老模型小鼠血液SOD、MDA、GSHPX的影響。結果高脂大鼠灌胃七周后,與高脂對照組比較茶蛋白10g/kg.bw、20g/kg.bw劑量組能顯著(zhù)降低血液中TG、TC含量;老齡小鼠與衰老模型組比較, 茶蛋白10g/kg.bw、20g/kg.bw劑量組能顯著(zhù)降低血液中MDA含量,且茶蛋白10g/kg.bw劑量組能明顯升高血液中SOD的活性;血液中GSHPX含量基本無(wú)變化。結論茶蛋白具有一定的降血脂及抗氧化作用。
關(guān)鍵詞:茶蛋白;降血脂;抗氧化

Effects of Tea Protein on reducing blood fat and oxidation resisting
Hua Wei
(ZheJiang Center for Disease Prevention and Control, Hangzhou 310009,China)

Abstract: Objective To study the effects of tea protein on reducing blood fat and oxidation resisting . MethodsThe changes of TG、TC、HDLC in blood serum of high blood fat rat and SOD、MDA、GSHPX in blood of aged model mice were observed after administered tea protein at different doses .Result Tea protein at the doses of 10g/kg.bw and 20g/kg.bw could significantly decrease the contents of TG、TC in blood compared with control group, after high blood fat rat had been administered tea protein for seven weeks. Tea protein could significantly reduce the contents of MDA in blood at the doses of 10g/kg.bw and 20g/kg. bw compared with aged model group.And it could markedly increase the activity of SOD in blood at the dose of 10g/kg.bw.But GSHPX in blood didn't change significantly. ConclusionTea protein has some effects on reducing blood fat and oxidation resisting.
Keywords: Tea protein; Reducing blood fat; Oxidation resisting

醫學(xué)研究表明,高脂血癥和高脂質(zhì)過(guò)氧化物含量是導致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素。因此降低血脂和脂質(zhì)過(guò)氧化物含量是防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、預防心腦血管疾病的重要措施。中國是世界上最大的茶葉產(chǎn)地之一,茶葉資源十分豐富。茶葉對人體具有多種生物學(xué)功能,如抗癌、降血脂和抗氧化等功能[1-4],這些生物學(xué)功能是以茶葉所含的多種有機和無(wú)機物質(zhì)為基礎的,如茶多酚、茶多糖、茶色素、茶蛋白等。茶蛋白粉中粗蛋白含量達到50%,并含有17種氨基酸[5]。有研究表明茶蛋白對預防放射治療時(shí)引起的致突變效應有保護作用[6],但對其降血脂及抗氧化功效研究卻鮮見(jiàn)報道。因此本文對茶蛋白降血脂及抗氧化作用等方面進(jìn)行了研究。
1 材料與方法
11 材料
111 受試物茶蛋白,用堿法從茶碴中分離提取,由浙江某工程技術(shù)學(xué)院提供,棕褐色濃稠液體。本實(shí)驗以蒸餾水為溶媒,配成各劑量濃度供試。
112 實(shí)驗動(dòng)物SD雄性大鼠(后簡(jiǎn)稱(chēng)大鼠)40只,體重范圍:160-200g;SPF級昆明種雄性老齡小鼠(后簡(jiǎn)稱(chēng)老齡鼠)50只,6月齡,體重范圍:40-60g,均由浙江省實(shí)驗動(dòng)物中心(生產(chǎn)許可證號:SCXK(浙)2003-0001)提供。
113 飼料基礎飼料:由浙江省實(shí)驗動(dòng)物中心提供。高脂飼料配制:用90.5%基礎飼料、2%膽固醇、0.5%膽鹽、7%豬油配制而成。
114 主要儀器與試劑Backman Foxpro CX4型全自動(dòng)生化分析儀、721B型分光光度計、低溫高速離心機等; MDA、SOD、GSH-PX測定試劑盒,由南京建成生物工程研究所提供,批號20040714。
12 方法
121 輔助降血脂功能實(shí)驗方法在實(shí)驗環(huán)境下大鼠喂飼基礎飼料觀(guān)察10d,取尾血,測定血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。 正式實(shí)驗開(kāi)始后,各組動(dòng)物用高脂飼料喂飼10d后,取尾血,再測定血清TC、TG、HDLC水平,確定高脂血癥模型建立后, 再根據TC水平,隨機分為1個(gè)高脂對照組、3個(gè)受試物劑量組,3個(gè)受試物劑量分別經(jīng)口灌胃給予5g/kg.bw、10g/kg.bw和20g/kg.bw的茶蛋白,為期七周,高脂對照組給同體積的蒸餾水,全程均給予高脂飼料,并每周稱(chēng)量動(dòng)物體重,并根據體重調整給藥量,于實(shí)驗結束禁食16h,測定血清TC、TG、HDL-C水平。
122 抗氧化功能實(shí)驗方法雄性老齡鼠在動(dòng)物房適應一周后,眼內眥靜脈取血,測定MDA、SOD、GSH-PX。按MDA水平分組。隨機分為1個(gè)模型對照組、3個(gè)受試物劑量組和一個(gè)陽(yáng)性對照組,每組10只小鼠。模型對照組給予蒸餾水,3個(gè)受試物劑量組分別給予5g/kg.bw、10g/kg.bw和20g/kgbw的茶蛋白,陽(yáng)性對照組給予25mg/kg.bw的維生素E油溶液。各實(shí)驗組小鼠均以灌胃方式給藥,灌胃容量為20ml/kg.bw。連續灌胃60d,每周稱(chēng)量動(dòng)物體重,并根據體重調整給藥量,實(shí)驗期末眼內眥靜脈取血觀(guān)察生化指標變化。
123 測定指標TC、TG、HDL-C;MDA、 SOD、 GSH-PX。
124 數據處理實(shí)驗數據統計采用SPSS11.5軟件包。
2 實(shí)驗結果
21 輔助降血脂功能實(shí)驗結果
211 大鼠常規喂飼基礎飼料10d,測得大鼠血清TC基礎值為1.77±0.21mmol/L。喂飼高脂飼料10d后,測得大鼠血清TC值為3.10±0.45mmol/L,與基礎值差別有統計學(xué)意義(t=-17711,P=2.625E-32),大鼠實(shí)驗性高脂血癥模型建立。
212 高脂血癥大鼠模型建立后,觀(guān)察給受試物對高血脂血癥大鼠體重的影響, 結果見(jiàn)表1, 給受試物前與給受試物4周、7周后,高、中、低三劑量組大鼠體重及體重增重和高脂對照組相比較, 差異均無(wú)統計學(xué)意義(方差分析, P>0.05)。

213 大鼠實(shí)驗性高脂血癥模型建立后, 繼續給予高脂飼料,分別于給受試物后的第4周、第7周末, 測定血清TC, 結果見(jiàn)表2,在第4周末中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TC含量與高脂對照組相比較,差異有統計學(xué)意義(q檢驗, P<0.05);在給受試物第7周末時(shí)中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TC含量進(jìn)一步降低,差異有統計學(xué)意義(q檢驗,P<0.01)。

214 大鼠實(shí)驗性高脂血癥模型建立后,繼續給予高脂飼料,分別于給受試物后的第4周、第7周時(shí), 測定血清TG,結果見(jiàn)表3,在給受試物第7周末時(shí)中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TG含量明顯低于高脂對照組,差異有統計學(xué)意義(q檢驗, P<0.05)。

215 大鼠實(shí)驗性高脂血癥模型建立后, 繼續給予高脂飼料, 分別于給受試物后的第4周、第7周時(shí), 測定血清HDL-C,結果見(jiàn)表4, 在第4周、第7周末時(shí),低、中、高劑量組高脂血癥大鼠血清HDL-C值和高脂對照組大鼠比較,差異均無(wú)統計學(xué)意義(方差分析, P>0.05)。


22 抗氧化功能實(shí)驗方法結果
221 受試物對老齡鼠體重的影響(表1)給受試物前、給受試物30d后,給受試物60d后,低、中、高3個(gè)劑量組及陽(yáng)性對照組老齡小鼠體重與模型對照組比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(方差分析,P>0.05)。說(shuō)明經(jīng)不同處理對小鼠體重無(wú)顯著(zhù)影響,受試物對小鼠生長(cháng)無(wú)明顯影響。

222 受試物對老齡鼠血液MDA水平的影響(表2)給受試物前,各實(shí)驗組小鼠血液MDA水平與模型對照組比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(方差分析,P>0.05)。給受試物60d后,高劑量組、陽(yáng)性對照組小鼠血液MDA水平明顯低于模型對照組,差異有統計學(xué)意義(方差分析, p<0.05)。

223 受試物對老齡鼠血液SOD水平的影響(表3)給受試物前,各實(shí)驗組小鼠血液SOD水平與模型對照組比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(方差分析, P>0.05)。給受試物60d后,中劑量組、陽(yáng)性對照組小鼠血液SOD水平明顯低于模型對照組,差異有統計學(xué)意義(方差分析, p<0.05)。
224 受試物對老齡鼠血液GSH-PX(表4)給受試物前與給受試物60d后,各劑量組和陽(yáng)性對照組小鼠血液GSHPX水平與模型對照組比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(方差分析,P>0.05)。


 

3 討論
隨著(zhù)人們生活水平的不斷提升,防止高脂血癥和延緩衰老日益成為百姓和學(xué)者共同關(guān)注的熱門(mén)話(huà)題和研究領(lǐng)域。高脂血癥對人體的損害呈現隱匿、逐漸、進(jìn)行性和全身性,它也是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死獨立而重要的危險因素。因此,人們稱(chēng)之為導致心血管疾病的“導火線(xiàn)”。而衰老更是一種復雜的生命現象,也是體內各種生化反應的綜合過(guò)程。隨著(zhù)年齡的增長(cháng),自由基的產(chǎn)生逐漸增多,清除自由基的相關(guān)酶類(lèi)的活性下降,機體內過(guò)量的氧自由基會(huì )對機體內的脂質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)等生命大分子造成損害[7],引起許多重要的抗氧化酶活性的喪失[8]。機體內的SOD可催化氧自由基的歧化反應,是機體清除氧自由基的重要酶類(lèi)。當機體由于老化、創(chuàng )傷等原因造成氧自由基產(chǎn)生增加,而同時(shí)組織中SOD活性降低時(shí),就會(huì )導致氧自由基堆積,引起脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強,促進(jìn)細胞膜上的不飽和脂肪酸的產(chǎn)生過(guò)氧化反應,使體內的MDA等過(guò)氧化產(chǎn)物的含量增加[9],最終導致細胞受損,機體逐漸趨向衰老[10]。因此,抗氧化是機體抗衰老的重要一環(huán), SOD和MDA則是衡量抗衰老藥物的重要實(shí)驗指標[11] 。VE是天然的脂溶性抗氧化劑,主要存在細胞膜性結構中,VE不但是單線(xiàn)態(tài)氧和O-的清除劑,更重要的是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的阻斷劑,故在本實(shí)驗中將其作為陽(yáng)性對照藥。
根據實(shí)驗結果,茶蛋白給予高脂大鼠灌胃四周后,中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TC含量與高脂對照組相比較,差異有顯著(zhù)性(P<0.05);在給受試物第7周末時(shí)中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TC含量進(jìn)一步降低,差異有統計學(xué)意義(P<0.01);同時(shí)在給受試物第7周末時(shí)中、高劑量組高脂血癥大鼠血清TG含量明顯低于高脂對照組,差異有統計學(xué)意義(P<0.05),表明茶蛋白對于高脂血癥大鼠血清TC的影響隨著(zhù)灌胃時(shí)間延長(cháng)至七周時(shí),逐漸呈現出輔助降血脂功效,顯示出茶蛋白所具有的獨特的緩慢過(guò)程,但低、中、高劑量組高脂血癥大鼠血清HDL-C值和高脂對照組大鼠比較,差異均無(wú)統計學(xué)意義,表明與其他具有降低血清TC、TG含量而同時(shí)降低血清HDL-C功效的成分相比而言,更能有效地防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、預防心腦血管疾病。
而茶蛋白10g/kg.bw劑量組能提高老齡小鼠紅細胞中SOD的活力(P<0.01),但不存在著(zhù)明顯的劑量反應關(guān)系表明它可使機體清除自由基的能力增強。而茶蛋白低、中、高劑量組卻能明顯降低老齡小鼠血漿脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛含量,并顯示出一定的劑量反應關(guān)系,表明茶蛋白可減輕機體脂質(zhì)過(guò)氧化反應、降低生物膜的過(guò)氧化程度,減輕機體代謝過(guò)程中氧化還原反應產(chǎn)生的自由基對機體的損害,從而起到預防和延緩機體衰老的抗氧化作用。
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