達能營(yíng)養中心第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì )論文集
孫要武 孫玲娜 李永志 李省三
（齊齊哈爾醫學(xué)院公共衛生系，齊齊哈爾，161042）
摘要：目的研究藥食兩用植物枸杞果防治大鼠脂肪肝的效果及其可能的作用機制，為進(jìn)一步開(kāi)展天然食用、藥用植物防治脂肪肝的研究奠定基礎。方法wistar雄性大鼠隨機分為4組。陰性對照組飼以普通飼料，自由飲水，每天以生理鹽水灌胃；模型組飼以高脂飼料，飲用15％酒精水，每天以50％酒精溶液灌胃；枸杞果液高、低劑量組在模型組的基礎上，同時(shí)以枸杞果液灌胃。實(shí)驗持續5周，以斷頭法處死大鼠并取血，以酶比色法測定血清甘油三酯（TG）、總膽固醇(TC)、天門(mén)冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)以及肝組織的TG和TC含量，并觀(guān)察肝臟組織的病理變化。結果模型組血清TC高于陰性對照組（P＜005），兩組的血清TG無(wú)顯著(zhù)差異；枸杞果液高劑量組血清TC低于模型組（P＜005），兩組的血清TG無(wú)顯著(zhù)差異；高劑量組與低劑量組之間TG、TC無(wú)顯著(zhù)差異。模型組肝組織TG、TC高于陰性對照組（P＜005）；枸杞果液高劑量組肝組織TC低于模型組（P＜005），兩組肝組織TG無(wú)顯著(zhù)差異；高劑量組與低劑量組之間TG、TC無(wú)顯著(zhù)差異。各組AST、ALT差異均無(wú)統計學(xué)意義。病理切片顯示，枸杞果液高、低劑量組大鼠肝細胞脂肪變性較輕，炎細胞浸潤輕于模型組。結論枸杞果液對酒精加高脂膳食大鼠脂肪肝有一定的防治效果，能降低大鼠血清及肝組織的TC含量，減輕大鼠肝細胞脂肪變性程度。
關(guān)鍵詞：枸杞果；大鼠；脂肪肝
近年來(lái)國內外許多學(xué)者對脂肪肝的防治進(jìn)行了一系列研究，積累了許多經(jīng)驗，據此前的實(shí)驗和藥理學(xué)研究發(fā)現［1］藥食兩用茄科植物枸杞具有一定的降血脂、保肝、抗脂肪肝作用，可降低血中甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白濃度及肝臟甘油三酯、總膽固醇。本實(shí)驗擬在采用綜合因素誘發(fā)大鼠脂肪肝實(shí)驗模型的同時(shí)，給予枸杞果液進(jìn)行干預，以進(jìn)一步探討其防治脂肪肝的作用及其機制。
1 材料與方法
11 實(shí)驗動(dòng)物
健康Wistar雄性大鼠40只，體重180～220g，由齊齊哈爾醫學(xué)院實(shí)驗動(dòng)物中心提供。
12 飼料
121 基礎飼料
齊齊哈爾醫學(xué)院實(shí)驗動(dòng)物中心提供。飼料營(yíng)養成分：粗蛋白20%，粗脂肪4%，鈣15%，磷1%，纖維5%，維生素A 14萬(wàn)IU／kg，維生素D 1500IU／kg，維生素E 120IU／kg，維生素B1 13mg／kg，維生素B2 12mg／kg，維生素B6 12mg／kg，維生素B12 0022mg／kg。
122 高脂飼料
基礎飼料90%，豬油10%，人工方法制成顆粒料，每周制備1次。
13 主要儀器與試劑
131 V2550島津紫外分光光度計、DZP102 恒溫振蕩器、SHAC恒溫水浴箱、MR1812離心機、OLYMPUS顯微鏡。
132 枸杞果液枸杞果（產(chǎn)地寧夏，購自齊齊哈爾醫學(xué)院第一附屬醫院藥劑科）100g加自來(lái)水至500ml制成勻漿。
133 甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）試劑盒中生北控生物科技股份有限公司，批號分別為220441和180141。
134 丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒、天門(mén)冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒長(cháng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號分別為2006002和 2006003。
135 豬油市售板油煉制。
14 實(shí)驗方法
141 動(dòng)物分組與處理
大鼠適應性飼養一周后，隨機分為4組，每組10只。陰性對照組喂飼基礎飼料，按1ml／100gbw體積每日1次生理鹽水灌胃，自由飲用自來(lái)水；其余各組喂飼高脂飼料，按1ml／100gbw體積每日1次50％酒精灌胃,自由飲用15％酒精水；枸杞果液低劑量組同時(shí)給予枸杞果液灌胃02g／100gbw，枸杞果液高劑量組同時(shí)給予枸杞果液灌胃04g／100gbw，連續5周。
142 標本采集與制備
1421 實(shí)驗結束時(shí)，各組大鼠禁食12小時(shí)，稱(chēng)重，斷頭取血于潔凈干燥試管內，離心(2200rpm, 20min)分離血清，所得血清－75℃冰箱凍存，用于血液生化檢測；迅速解剖，取出肝臟，沖洗后濾紙吸干，稱(chēng)肝濕重，在肝中葉剪下8mm×8mm×4mm大小組織塊，置于80％酒精溶液中固定，用于病理切片；其余肝組織速凍后，-75℃冰箱凍存，用于肝組織勻漿生化檢測。
1422 光鏡標本的制作固定的肝組織塊石蠟包埋，常規切片，HE染色，光鏡下進(jìn)行常規病理學(xué)檢查。
1423 肝組織樣品全脂質(zhì)萃取取肝臟自然解凍，冰生理鹽水沖洗、濾紙吸濕后，稱(chēng)取濕重200mg，加入抽提液（1∶1甲醇／氯仿混合液）2ml，用玻璃勻漿器制成10%組織勻漿，振蕩抽提24h，2000rpm／min離心l0min，取上清測定肝脂質(zhì)。
143 觀(guān)察指標及測定方法
1431 體重及一般狀況包括大鼠的食物利用率、體重、狀態(tài)、皮毛、死亡等。
1432 生化指標測定分別按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。ALT、AST、TG、TC的測定均采用酶比色法。
1433 光鏡標本由病理科醫師盲法閱片。
15 數據處理
計量資料以均數±標準差(X±S)表示，用SPSS130軟件包作方差分析，組間均數差異的比較用單因素方差分析（oneway ANOVA），多組間均數的兩兩比較，采用SNK檢驗，P＜005有統計學(xué)意義。
2 結果
21 對大鼠體重及一般狀況的影響
實(shí)驗過(guò)程中，模型組大鼠死亡3只，枸杞果液高、低劑量組各死亡2只。陰性對照組大鼠體重持續增加，其它組大鼠早期體重下降明顯，隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)，體重變化趨于平穩，實(shí)驗結束時(shí)，模型組及枸杞果液高、低劑量組大鼠的平均體重低于陰性對照組（P＜005）；模型組大鼠肝指數（即肝濕重／體重×100）與陰性對照組比較，無(wú)統計學(xué)差異（P＞005），枸杞果液高、低劑量組大鼠肝指數與模型組比較，亦無(wú)統計學(xué)差異（P＞005），（表1）。
各組大鼠的平均飲酒量沒(méi)有統計學(xué)差異（P＞005）。模型組大鼠皮毛灰暗、凌亂、無(wú)光澤，精神不振，活動(dòng)減少，食物利用率低于陰性對照組，有統計學(xué)差異（P＜005）；枸杞果液高、低劑量組大鼠皮毛光滑，有光澤，活動(dòng)較多，食物利用率與模型組比較無(wú)統計學(xué)差異（P＞005），（表2）。
22 對大鼠AST、ALT的影響
模型組血清AST、ALT與陰性對照組比較，無(wú)統計學(xué)意義（P＞005）；枸杞果液高、低劑量組與模型組比較，均無(wú)統計學(xué)意義（P＞005），（表3）。
23 對大鼠血脂的影響
模型組血清TC高于陰性對照組，差異有統計學(xué)意義（P＜005），兩組的血清TG無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005）。枸杞果液高劑量組血清TC低于模型組，差異有統計學(xué)意義（P＜005），兩組血清TG無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005）。枸杞果液低劑量組與模型組之間、高劑量組與低劑量組之間血清TG、TC無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005），（表4）。
24 對大鼠肝組織TG、TC的影響
模型組肝組織TG、TC高于陰性對照組，差異有統計學(xué)意義（P＜005）。枸杞果液高劑量組肝組織TC低于模型組，差異有統計學(xué)意義（P＜005），兩組肝組織TG無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005）。枸杞果液低劑量組與模型組之間、高劑量組與低劑量組之間TG、TC無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005），（表5）。
25 大鼠肝臟的病理學(xué)檢查
251 肉眼觀(guān)察陰性對照組大鼠肝臟色澤暗紅，被膜光滑，切面光潔；模型組大鼠肝臟質(zhì)地較軟，切面略帶油膩感。枸杞果液高、低劑量組大鼠肝臟顏色紅潤，被膜光滑，質(zhì)地接近正常肝組織。
252 光鏡檢查陰性對照組肝小葉結構清晰，細胞索排列整齊，肝竇正常，肝細胞無(wú)明顯病變，核結構清晰；模型組肝細胞脂肪變性，肝細胞核周?chē)兄究张荩兗毎邪吮粩D向一側，匯管區、肝小葉內明顯的炎細胞浸潤，肝小葉內可見(jiàn)點(diǎn)狀壞死，小葉界限不清，細胞索紊亂。枸杞果液高、低劑量組大鼠肝細胞脂肪變性較輕，炎細胞浸潤輕于模型組，肝小葉結構清晰，細胞索排列較整齊。
3 討論
脂肪肝是由多種原因和疾病引起的肝細胞內脂質(zhì)異常沉積的病理改變，并非臨床上的一個(gè)獨立性疾病。常見(jiàn)致病因素有酒精中毒、高脂飲食、藥物／毒物中毒等。其發(fā)病機制復雜，至今尚未完全闡明。多種原因引起脂肪代謝障礙，肝細胞內TG合成增加或／和VLDL合成與分泌之間的不平衡，導致脂質(zhì)在肝細胞中的異常堆積，是脂肪肝形成的主要原因［2］。國內關(guān)于脂肪肝的流行病學(xué)研究認為，體重指數（BMI）特別是反映內臟脂肪肥胖的腹圍／臀圍增加，高血壓、高血脂、高血糖、嗜酒、高脂高蛋白飲食、臨睡前加餐等為脂肪肝的危險因素，患者中肥胖或高脂飲食伴有飲酒史者占一定比例［3］。
本實(shí)驗參考有關(guān)文獻報道，以酒精（平均攝入量為1271g／kg／d）加高脂膳食，建立大鼠脂肪肝實(shí)驗模型。結果顯示模型組大鼠肝細胞脂肪變性，肝細胞核周?chē)兄究张荩瑓R管區、肝小葉內明顯的炎細胞浸潤，肝小葉內可見(jiàn)點(diǎn)狀壞死，小葉界限不清，細胞索紊亂。
由于脂肪肝與高脂血癥之間關(guān)系密切，臨床上常用降脂藥治療脂肪肝。一些降脂藥對脂肪肝有效，但許多降脂藥反而加重肝損傷［4，5］。枸杞果為茄科植物枸杞（Lycium chinense Mill）或寧夏枸杞的成熟果實(shí)，既可入藥，亦可食之。據《神農本草經(jīng)》記載，枸杞子性平、味甘，具有滋補肝腎、益精明目的功效；現代藥理學(xué)研究表明其含有枸杞多糖、甜菜堿、類(lèi)胡蘿卜素及核黃素、硫胺素等化學(xué)成分［6］，動(dòng)物實(shí)驗證明枸杞多糖、甜菜堿具有抗氧化、保肝、抗脂肪肝、降血脂等作用［7，8］。
本實(shí)驗模擬人體食用方式，以枸杞果勻漿液對酒精加高脂膳食致大鼠脂肪肝進(jìn)行干預，結果顯示：大鼠的皮毛光滑、有光澤，活動(dòng)多于模型組；肝內脂肪變性和炎癥浸潤程度與模型組比較略有減輕。
實(shí)驗結果提示，枸杞果液具有降低血清和肝內膽固醇的作用，高劑量組血清和肝內TC明顯低于模型組（P＜005）。膽固醇是體內重要的脂質(zhì)。流行病學(xué)研究顯示約有377％的脂肪肝患者血液膽固醇升高，說(shuō)明血清膽固醇升高可能為脂肪肝形成的間接原因。一般認為必需脂肪酸缺乏可使磷脂合成減少，進(jìn)而使TG轉運困難，造成脂肪堆積，而膽固醇可與磷脂爭奪必需脂肪酸從而促進(jìn)脂肪肝形成。另一方面，肝臟是膽固醇合成和降解的主要部位，脂肪肝患者肝細胞降解膽固醇能力下降，也可能會(huì )導致膽固醇的升高，形成惡性循環(huán)。
文獻報道，枸杞子的活性成分甜菜堿能夠降低TG、VLDL和 LDLC水平，其機制可能是抑制肝內VLDL和 LDL的生物合成，或增加VLDL和 LDL的降解速度和轉化為HDL的速度［8］。本次實(shí)驗未能觀(guān)察到枸杞果液明顯降低脂肪肝大鼠血清和肝組織甘油三酯的作用，其原因有待于進(jìn)一步探討。
參考文獻
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