摘要：目的探討苯并(a)芘（B(a)P）對肝細胞DNA損傷作用及牛磺酸（Tau）的干預效果。方法以健康人胚肝細胞（L-02細胞）為靶細胞，采用完全隨機實(shí)驗設計，分為4組：①空白及溶劑對照組；②B(a)P組：25、50μM的B(a)P加入細胞培養體系后培養2h；③Tau組：設05、10、20、40mM四個(gè)濃度，加入培養體系后培養24h；④Tau預防組：先分別以四個(gè)不同濃度的Tau預處理24h，再加入25μM的B(a)P，培養2h。各組培養結束后收集細胞用單細胞凝膠電泳技術(shù)檢測細胞DNA損傷。收集培養上清液測定丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）、天門(mén)冬酸氨基轉移酶(AST)和丙氨酸氨基轉移酶(ALT)含量。結果（1）B(a)P能引起L-02細胞明顯的DNA損傷，與對照組相比差異顯著(zhù)，同時(shí)可使細胞培養上清液中MDA、ALT、AST含量升高、GSH含量降低；（2）Tau預處理能明顯減輕B(a)P引起的肝細胞DNA損傷，抑制B(a)P引起的MDA、AST、ALT含量升高和GSH含量下降，其作用隨Tau劑量增加而增加；（3）肝細胞DNA損傷的Oliver尾矩值與培養上清液中MDA、AST、ALT含量呈明顯正相關(guān)，與GSH含量呈明顯負相關(guān)。結論B(a)P可誘導健康人胚肝細胞DNA損傷，使MDA、AST、ALT水平升高、GSH含量降低。Tau可拮抗上述B(a)P的細胞毒性。提示B(a)P誘導L-02細胞的氧化損傷可能在細胞DNA損傷作用中起重要作用，而Tau具有抗B(a)P氧化損傷的作用。
關(guān)鍵詞：牛磺酸；苯并(a)芘；健康人胚肝細胞；肝細胞毒性；DNA損傷；單細胞凝膠電泳

牛磺酸（taurine，Tau）是人體內含量較高的一種條件氨基酸，研究表明，Tau具有多種生物學(xué)功能，如調節細胞內外鈣穩態(tài)、穩定細胞膜、抗氧化、抑制腫瘤細胞增殖及膠原形成、對外源化合物的解毒作用等，這些作用還可相互關(guān)聯(lián)，如通過(guò)調節細胞內外鈣穩態(tài)，發(fā)揮抗氧化作用，繼而保護細胞膜的完整。已知肝細胞損傷的發(fā)生與肝臟內自由基或脂質(zhì)過(guò)氧化物的作用有密切關(guān)系，自由基可產(chǎn)生反應活性氧（ROS），ROS可對細胞脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、氨基酸、DNA等多種成分造成損害。研究發(fā)現，Tau通過(guò)抗氧化作用可拮抗醋氨酚、環(huán)孢霉素A等多種毒物引起的肝細胞損害［1，2］。苯并(a)芘（B(a)P）是廣泛存在于人類(lèi)食品中的一種化學(xué)污染物，如某些行業(yè)排放的“三廢”中含有大量的B(a)P，造成環(huán)境和空氣污染，通過(guò)“食物鏈”的生物富集作用而污染食物；食物在烘烤或熏制過(guò)程中，會(huì )受到燃燒產(chǎn)物中B(a)P的污染；食物成分（尤其是脂肪）在高溫下可產(chǎn)生B(a)P等。盡管已知B(a)P是一類(lèi)高毒性、強致癌物，對人體健康危害極大，但它對人肝細胞毒性作用如何？Tau是否可拮抗其肝毒性及機制如何？相關(guān)報道較少。本研究采用單細胞凝膠電泳技術(shù)（SCGE）來(lái)分析B(a)P誘導健康人胚肝細胞（L-02細胞）DNA的損傷作用以及牛磺酸的保護效應，同時(shí)測定脂質(zhì)過(guò)氧化損傷主要終產(chǎn)物丙二醛（MDA）、抗氧化主要物質(zhì)還原型谷胱甘肽（GSH）及肝細胞損傷漏出酶（AST、 ALT)含量的改變，探討Tau對B(a)P肝細胞毒性的保護作用，以期為建立化學(xué)毒物致人肝細胞DNA損傷模型和尋找有效的營(yíng)養保護因子提供科學(xué)依據。
1 材料與方法
11主要儀器
CO2培養箱，DYY－Ⅲ7型電泳儀、電泳槽（北京市六一儀器廠(chǎng)），冷凍離心機（上海安庭科學(xué)儀器廠(chǎng)），熒光顯微鏡和熒光數碼顯微成像系統（日本OLYMPUS公司）。
12 主要試劑
培養基（DMEM，美國Gibco公司），小牛血清（新西蘭PerbBio公司），胰蛋白酶（Difco武漢中鍵科技開(kāi)發(fā)公司），正常熔點(diǎn)瓊脂糖（NMPA，德國Merck Darmstadt公司），低熔點(diǎn)瓊脂糖（LMPA，上海YITO BIOINSTRUMENT公司），TritonX100（SinoAmerican Biotec），溴化乙錠（EB，Sigma進(jìn)口分裝），二甲基亞砜（DMSO，Sigma公司），Taurine (Sigma公司）， B(a)P(Sigma公司)。
13 分組處理
L-02細胞來(lái)自武漢大學(xué)中國典型培養物保藏中心。取對數生長(cháng)期的L-02細胞40μl，與04％臺盼藍按1∶1混合，觀(guān)察細胞存活率。若細胞存活率不低于95％，可用于試驗。按每孔細胞數約1X105個(gè)，將細胞接種到6孔培養板，置CO2培養箱培養12h使細胞貼壁，12h后更換新鮮培養基用于以下試驗。細胞隨機分為4組：①對照組：空白對照及DMSO（10me／L）溶劑對照組；②B(a)P組：為損傷模型組，B(a)P設高（50μM）、低(25μM)兩個(gè)劑量，加入培養體系后繼續培養2h；③Tau組：設05，10，20，40mM四個(gè)濃度，加入培養體系后繼續培養24h；④Tau預防組：L-02細胞先以四個(gè)不同濃度的牛磺酸預處理24h，再加入25μM的B(a)P，培養2h。四組每種物質(zhì)、每種濃度設3個(gè)復孔，培養體系里小牛血清濃度均為10％。培養結束后收獲細胞進(jìn)行SCGE分析，用培養上清液測定MDA、GSH、天門(mén)冬酸氨基轉移酶(AST)和丙氨酸氨基轉移酶(ALT)含量。
14 肝細胞
DNA損傷測定：采用SCGE技術(shù)，參照Singh方法【1】，操作步驟包括制片、裂解、解旋、電泳、中和和染色，最后在熒光顯微鏡下（100W汞燈作為熒光光源，激發(fā)波長(cháng)為549nm，發(fā)射波長(cháng)為590nm）觀(guān)察、測定。未受損的細胞核表現為一圓形熒光核心，即彗星頭部，沒(méi)有拖尾；而受損的細胞則有彗星尾從核中伸向陽(yáng)極，形成一個(gè)亮的熒光頭部和尾部。每片隨機觀(guān)察計數100個(gè)細胞核并拍照。計算平均Oliver尾矩值及標準差，并進(jìn)行統計分析。根據“彗星”尾中DNA含量占彗星DNA總量的百分比將細胞損傷進(jìn)行分級［1］，計數不同損傷級別的細胞核數。0級：＜5%，代表無(wú)損傷；Ⅰ級：5%～20%，代表輕度損傷；Ⅱ級：20%～40%，代表中度損傷；Ⅲ級：40%～95%，代表重度損傷；Ⅳ級：≥95%，代表完全損傷。
15 MDA、GSH、AST、ALT的測定
分光光度法，用南京建成生物工程研究所產(chǎn)的檢測試劑盒。
16 資料統計分析
上述所有指標重復測3次取均值。數據采用SPSS統計軟件處理，對于計量資料，各組間的顯著(zhù)性檢驗用方差分析，各實(shí)驗組與對照組間比較用GamesHowell檢驗；計數資料采用秩和檢驗；采用一元線(xiàn)性相關(guān)分析各指標間的相關(guān)性。
2 結果
21 B(a)P對人胚肝細胞DNA損傷及Tau
的保護作用各組3次重復試驗的數據均服從正態(tài)分布。由表1可見(jiàn)，25，50μM的B(a)P均能引起L-02細胞明顯的DNA單鏈斷裂損傷，其Oliver尾矩值與溶劑對照組相比差異有顯著(zhù)性（P＜001），隨著(zhù)B(a)P劑量升高，引起細胞損傷的Oliver尾矩值也增大（P＜001）；05～40mM的Tau對L-02細胞未見(jiàn)有毒性作用，Oliver尾矩值隨著(zhù)Tau劑量增大有減小趨勢；若預先用Tau預處理L-02細胞，可明顯減輕細胞DNA損傷，其Oliver尾矩值與單純25μM的B(a)P組相比差異有顯著(zhù)性（P＜001），且Oliver尾矩值隨著(zhù)Tau劑量增大而減小，40mM的Tau的保護作用尤其顯著(zhù)。B(a)P對L-02細胞DNA損傷及Tau保護作用的彗星圖像見(jiàn)附圖。
表2顯示，B(a)P誘導不同損傷級別的細胞數不同（P＜001），隨B(a)P劑量增大，細胞損傷嚴重程度增加；10mM的Tau引起的細胞DNA損傷級別與空白對照無(wú)顯著(zhù)差異（P＞005），其余劑量組與空白對照相比，各級損傷細胞數不同（P＜001），05 mM的Tau引起細胞損傷的級別稍加重，而2～40mM的Tau可使細胞損傷減輕；若預先用05～40mM的Tau預處理L-02細胞，可明顯減輕細胞DNA損傷，與單純25μM的B(a)P組相比，各級損傷細胞數有顯著(zhù)性差異（P＜001），隨Tau劑量增大，細胞損傷嚴重程度減輕。以上結果與Oliver尾矩值顯示的結果基本一致。

圖1B(a)P致L-02細胞核DNA損傷及Tau保護作用的彗星圖像（附圖）
22 B(a)P對L-02細胞培養上清液MDA、
GSH的影響及Tau的保護作用從表3可見(jiàn)，B(a)P引起人胚肝細胞培養上清液中MDA含量增加和GSH含量降低（P＜005）；其中MDA含量隨著(zhù)Tau濃度增加而降低，2～40mM的Tau組與空白對照相比差異有顯著(zhù)性意義（P＜005），而GSH含量在Tau組與空白對照組之間無(wú)顯著(zhù)差異，但有隨Tau濃度增加而增加的趨勢；Tau預防組培養上清液中MDA含量雖然與單純B(a)P組比較無(wú)顯著(zhù)性差異，但加入Tau可使MDA含量降低，使GSH含量上升并隨Tau劑量增加而增加，與單純B(a)P組比較差異顯著(zhù)（P＜001）。
B(a)P對L-02細胞培養上清液AST、ALT的影響及Tau的保護作用
如表4所示，B(a)P可引起人胚肝細胞培養上清液中AST和ALT含量升高（P＜001～005），但Tau組卻與空白對照組無(wú)顯著(zhù)差異；Tau預防組可使培養上清液中AST和ALT含量降低，與單純B(a)P組比較差異顯著(zhù)（P＜001～005）。

24 B(a)P及Tau對L-02細胞DNA損傷
的影響和（抗）氧化指標相關(guān)性分析將25μM B(a)P組對人胚肝細胞DNA損傷的Oliver尾矩值與培養上清液中各檢測指標及Tau干預組數值做直線(xiàn)相關(guān)分析發(fā)現，Olive尾矩值與MDA含量呈明顯正相關(guān)（r=0852，P＜001），與GSH含量呈明顯負相關(guān)（r=-0929，P＜001），與AST、ALT含量呈明顯正相關(guān)（r=0930和0927，P＜001）。

表2B(a)P致L-02細胞DNA損傷分級及Tau的保護作用
組別〖〗0級〖〗Ⅰ級〖〗Ⅱ級〖〗Ⅲ級以上空白對照〖〗46〖〗50〖〗4〖〗005 mM Tau〖〗47〖〗37〖〗16〖〗010mM Tau〖〗56〖〗40〖〗4〖〗020mM Tau〖〗57〖〗41〖〗2〖〗040mM Tau〖〗65〖〗34〖〗1〖〗0DMSO對照〖〗28〖〗67〖〗5〖〗0B(a)P25μM〖〗0〖〗67〖〗28〖〗5B(a)P50μM〖〗0〖〗49〖〗42〖〗925μM B(a)P + 05 mM Tau〖〗12〖〗50〖〗38〖〗025μM B(a)P + 10mM Tau〖〗14〖〗50〖〗36〖〗025μM B(a)P + 20mM Tau〖〗16〖〗64〖〗20〖〗025μM B(a)P + 40mM Tau〖〗16〖〗78〖〗6〖〗0
表3 B(a)P對L-02細胞培養上清液MDA、GSH的影響及Tau的保護作用（X±S）
組別〖〗MDA〖〗GSH空白對照〖〗5817±0282〖〗21465±77405 mM Tau〖〗5993±066〖〗421536±124010mM Tau〖〗4743±0766〖〗21822±102020mM Tau〖〗4563±0820*〖〗23319±214840mM Tau〖〗4253±0472*〖〗25209±2103DMSO對照〖〗5817±0675〖〗12836±214B(a)P 25μM〖〗7650±0817*〖〗10947±539*25μM B(a)P+ 05 mM Tau〖〗6577±0135〖〗14477±728△△25μM B(a)P+ 10mM Tau〖〗6397±0509〖〗16045±849△△25μM B(a)P + 20mM Tau〖〗64000±1347〖〗1715067±405△△25μM B(a)P + 40mM Tau〖〗63067±1075〖〗1978933±1127△△注：與溶劑對照組相比，*P＜ 005；與單純25μM的B(a)P組相比，△△P＜001
表4B(a)P對L-02細胞培養上清液AST、ALT的影響及Tau的保護作用（X±S）
組別〖〗AST〖〗ALT空白對照〖〗2106±043〖〗2399±35105 mM Tau〖〗2068±129〖〗2437±33710mM Tau〖〗2068±127〖〗2177±75220mM Tau〖〗1936±107〖〗1956±13740mM Tau〖〗2031±075〖〗1840±159DMSO對照〖〗2124±139〖〗2784±088B(a)P 25μM〖〗3093±043**〖〗3901±569* 25μM B(a)P + 05 mM Tau〖〗2961±246〖〗3073±37625μM B(a)P + 10mM Tau〖〗2575±142△〖〗2707±148△25μM B(a)P + 20mM Tau〖〗2388±268△△〖〗2524±1002△25μM B(a)P + 40mM Tau〖〗2331±329△△〖〗2485±252△注：與溶劑對照組相比，**P＜ 001；與單純25μM的B(a)P組相比，△P＜005，△△P＜001
3 討論
31 B(a)P對健康人胚肝細胞的毒性
B(a)P是一種公認的環(huán)境和食品污染物，對人和動(dòng)物具有一定的毒性和強烈的致癌作用，是世界衛生組織確定的食物中三大強致癌物質(zhì)之一，在致癌物分類(lèi)中屬于A(yíng)類(lèi)致癌物。其在體內需經(jīng)代謝活化轉變成終致癌物后才具有致突變和致癌作用。B(a)P大部分經(jīng)肝、肺細胞微粒體中細胞色素P-450酶系代謝活化形成終致癌物二羥基環(huán)氧化物，該環(huán)氧化物可與靶細胞DNA結合，形成加合物引起DNA損傷，從而啟動(dòng)致突變、致癌過(guò)程［3，4］。B(a)P代謝產(chǎn)物之一的反式7，8二羥9，10環(huán)氧化苯并芘是代謝終致癌物，可與DNA結合而損傷DNA并引起突變。此外，B(a)P代謝過(guò)程中可產(chǎn)生多種ROS，當細胞內ROS處于較高水平超過(guò)細胞清除能力時(shí)也會(huì )引起脂質(zhì)過(guò)氧化并誘導DNA損傷［5］。
B(a)P在機體內的代謝主要在肝臟進(jìn)行，但其對肝細胞DNA損傷及致肝癌的相關(guān)報道不多，Gao YJ等［6］研究發(fā)現B(a)P在50μM時(shí)可引起人胚肺細胞DNA的明顯損傷。Garry S等［7］發(fā)現經(jīng)氣道染毒B(a)P 3mg可引起大鼠肝細胞、肺細胞及外周血淋巴細胞DNA損傷；Garry S［8］亦發(fā)現Fe2O3 075mg單獨給予不能引起大鼠肝肺等細胞的DNA損傷，而B(niǎo)(a)P075mg單獨給予即可引起肝肺細胞的DNA損傷，Fe2O3及B(a)P聯(lián)合給予則可增強肝肺細胞的DNA損傷。本課題用SCGE來(lái)分析食品污染物B(a)P誘導健康人胚肝細胞DNA的損傷，建立化學(xué)毒物致肝細胞損傷的體外實(shí)驗研究模型，同時(shí)探討食物中的營(yíng)養成份Tau對B(a)P肝毒性的保護作用。
本試驗結果表明：25、50μM的B(a)P在體外試驗中均能引起L-02細胞明顯的DNA單鏈斷裂損傷，其Oliver尾矩值與溶劑對照組相比差異有顯著(zhù)性；高低劑量B(a)P之間引起L-02細胞的DNA損傷也有差異性，隨著(zhù)B(a)P劑量升高，引起細胞DNA損傷的作用也增大。DNA損傷分級結果顯示：各組誘導不同損傷級別的細胞數均不同， B(a)P組與溶劑對照組相比，無(wú)損傷及輕度損傷細胞數較少，而中、重度損傷細胞數增多；高低劑量的B(a)P組相比，高劑量的B(a)P引起的細胞DNA損傷級別有加重趨勢。從以上結果可以看出，25μM的B(a)P即可引起L-02細胞DNA的明顯損傷，并隨劑量增加而損傷加重。
化學(xué)性毒物產(chǎn)生毒性作用的機制復雜多樣，其中脂質(zhì)過(guò)氧化被認為是重要的機制之一，它所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物可以引起多種細胞功能的損傷，并且和疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。MDA是氧自由基作用于生物膜中的多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應的終產(chǎn)物，不僅可改變膜結構和膜通透性，而且MDA易與核苷酸結合形成加合物，造成DNA鏈上易受物理、化學(xué)因素攻擊的薄點(diǎn)，其與鳥(niǎo)苷反應生成的加合物M1G，能引起移碼突變、堿基對替換和DNA鏈斷裂［9］等。MDA的高低反映了細胞受自由基攻擊的嚴重程度，是反映機體氧化損傷的最具代表性的指標之一。GSH既可以與嗜電子毒物結合，阻斷毒性化合物對DNA、RNA及蛋白質(zhì)的損害，又可以作為重要的還原劑，保護體內蛋白質(zhì)或酶分子中巰基免遭氧化，是機體抵抗活性氧的主要物質(zhì)之一［10，11］，其水平的降低反映了組織或細胞氧化應激的程度。細胞中GSH含量降低，其抗氧化能力便會(huì )下降，使外來(lái)有害因素對細胞的脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強。本研究結果顯示：B(a)P引起L-02細胞培養上清液中MDA含量增加及GSH含量降低，酶學(xué)測定結果可見(jiàn)AST、ALT含量均顯著(zhù)升高。結果提示脂質(zhì)過(guò)氧化損傷在B(a)P致肝細胞損傷機制中起重要作用，與Godschalk R等［6］的研究結果相符。
32 Tau對B(a)P致健康人胚肝細胞毒性的保護作用Tau是機體內含量最豐富的自由氨基酸，主要分布在細胞內，具有十分廣泛的生物學(xué)效應。缺乏Tau可引起機體生長(cháng)發(fā)育缺陷、免疫缺陷、心血管疾病、肝膽系統損傷等。在Tau眾多的生物學(xué)作用中，抗氧化作用越來(lái)越受重視，其直接作用是由其分子中的氨基與氧化劑結合從而阻止了氧化作用的發(fā)生，如Tau與強氧化劑HOCl作用時(shí)生成牛磺氯胺，從而解除了HOCl對組織細胞的氧化損傷作用并且可直接誘導腫瘤細胞凋亡［12，13］；間接抗氧化作用可能是Tau能機械地進(jìn)入細胞膜，穩定細胞膜的脂質(zhì)成分，從而抵抗氧化劑的攻擊［14］，故Tau對多種氧化劑造成的細胞損傷具有良好的拮抗作用。肝臟是合成Tau的主要器官，如肝臟受到毒物的侵害，可影響Tau的合成，使肝臟及其它組織Tau濃度降低，更易受到有害因素的影響。
文獻資料表明，Tau通過(guò)抗氧化作用可對抗多種與氧化損傷有關(guān)的肝臟疾病：（1）Tau可有效防治大鼠酒精性肝損傷。乙醇在體內可通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化而引發(fā)肝臟疾病［15］，同時(shí)給予Tau后則降低脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程及提高酶和非酶系抗氧化劑含量而減輕乙醇的毒性［16,17］。（2）肝臟缺血再灌注以后引起線(xiàn)粒體損傷，用Tau等加入再灌注液和貯藏液可減少乳酸脫氫酶、轉氨酶、谷胱甘肽S轉移酶的漏出，對缺血再灌注肝損傷起保護作用［18］。（3）脂質(zhì)過(guò)氧化還可激活枯否細胞和肝星狀細胞（HSC），并造成過(guò)量細胞外基質(zhì)的沉積，在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。自由基清除劑能抑制HSC活化、增殖并抑制合成。Chen YX等［19］觀(guān)察到5～50mM范圍的Tau可劑量依賴(lài)性抑制離體HSC增殖，故可對抗HSC引起的肝纖維化。(4)肝臟對藥物、化學(xué)毒物解毒的過(guò)程中同時(shí)會(huì )產(chǎn)生大量的自由基，當產(chǎn)生量超過(guò)肝臟的清除能力時(shí)，極易造成肝細胞損傷。研究發(fā)現Tau可減輕某些毒物、藥物的肝毒性，與減輕肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)［20,21］。有研究發(fā)現一些抗氧化營(yíng)養因子可對抗B(a)P引起的細胞DNA損傷，如大鼠給予B(a)P后分離肝細胞可見(jiàn)肝細胞DNA損傷，而在食物中同時(shí)給予VitE、VitA則可減輕其損傷作用［22］；Gajecka M等［23］觀(guān)察到VitC、VitE通過(guò)和ROS競爭與DNA結合可拮抗B(a)P誘導的健康人外周血淋巴細胞的基因毒性；硒是抗氧化酶主要成分之一，Yu RA 等［24］證明亞硒酸鈉可對抗B(a)P導致的小鼠肺細胞的DNA損傷。Yen GC等［25］發(fā)現抗氧化劑綠茶、烏龍茶、黑茶及提取物茶多酚可減輕B(a)P引起的癌化程度低的Chang liver cell的DNA損傷。本研究顯示：不同濃度Tau預處理所致L-02細胞的Oliver尾矩值與空白對照組無(wú)顯著(zhù)差異，且能明顯減輕25μM的B(a)P引起的細胞DNA損傷，與單純毒物組相比差異有顯著(zhù)性，且Oliver尾矩值隨著(zhù)Tau劑量增大而減小，40mM的Tau的保護作用尤其顯著(zhù)。表明Tau有良好的拮抗B(a)P誘導肝細胞DNA損傷效果。對培養上清液中MDA及GSH含量測定結果表明，MDA含量隨著(zhù)Tau濃度增加而降低，2～40mM的Tau組與空白對照組相比差異有顯著(zhù)性；Tau預防組MDA含量雖然與B(a)P組比較無(wú)顯著(zhù)性差異，但加入Tau可使MDA含量降低。Tau組GSH含量與空白對照組無(wú)顯著(zhù)差異，且有隨Tau濃度增加而增加的趨勢；Tau預防組GSH含量增高，與B(a)P組比較有極顯著(zhù)差異，且隨Tau劑量增加而增加。提示Tau具有拮抗B(a)P引起的L-02細胞MDA含量升高及GSH下降的作用。Pearson相關(guān)性分析表明，健康人胚肝細胞DNA損傷的Olive尾矩值與MDA含量呈明顯正相關(guān)，與GSH含量呈明顯負相關(guān)，顯示氧化損傷在B(a)P致L-02細胞損傷機制中起重要作用，脂質(zhì)過(guò)氧化損傷指標MDA升高和抗氧化酶GSH降低可在一定程度上反映肝細胞DNA損傷情況。培養上清液中轉氨酶AST、ALT測定結果顯示：Tau組與空白對照組無(wú)顯著(zhù)差異，1～40mM的Tau預防組可顯著(zhù)抑制B(a)P引起的轉氨酶升高，表明Tau具有拮抗B(a)P引起肝細胞AST、ALT含量升高的作用。Pearson相關(guān)性分析表明，健康人胚肝細胞DNA損傷的Olive尾矩值與AST、ALT含量呈明顯正相關(guān)，表明轉氨酶含量升高也可在一定程度上反映肝細胞DNA損傷情況。
綜上所述，本研究發(fā)現B(a)P可誘導健康人胚肝細胞DNA損傷，并且在較低劑量下即能產(chǎn)生明顯損傷作用； Tau通過(guò)減輕肝細胞氧化損傷，可顯著(zhù)拮抗B(a)P引起的L-02細胞毒性，顯示Tau不失為一種具有抗化學(xué)性肝損傷的營(yíng)養物質(zhì)。研究結果還提示：可通過(guò)B(a)P染毒 L-02細胞來(lái)建立含肝毒性有效評價(jià)指標的細胞DNA損傷體外試驗模型，以此作為一個(gè)靈敏、快捷、準確地篩選無(wú)毒副作用、有良好效果的保肝護肝營(yíng)養及藥用物質(zhì)的科研平臺，對進(jìn)一步促進(jìn)抗肝病、抗腫瘤的創(chuàng )新研究有一定的現實(shí)意義。
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