陳菲 張偉利 蔣明華 何稼敏

(上海交通大學(xué)醫學(xué)院附屬上海新華醫院，上海市兒科醫學(xué)研究所，上海，200092)

 

摘要：目的采集嬰兒口腔頰粘膜細胞來(lái)測定嬰兒體內的脂肪酸成份，來(lái)了解測定嬰兒口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份能否反映嬰兒體內的脂肪營(yíng)養狀況。方法從2005年9月1日至12月30日采集了在上海交通大學(xué)醫學(xué)院附屬新華醫院新生兒病房住院的新生兒共32例，其中足月兒27例（胎齡37-41周），早產(chǎn)兒5例（胎齡32-36周）。日齡0－30天（平均20天）。每例嬰兒均同時(shí)采集口腔頰粘膜細胞和血液標本。采用氣相色譜法測定嬰兒口腔頰粘膜細胞，血漿和紅細胞膜中的脂肪酸成份并進(jìn)行比較。采用SPSS11.5版軟件進(jìn)行統計學(xué)分析。結果氣相色譜法可測出嬰兒口腔頰粘膜細胞中多種脂肪酸成份，嬰兒口腔頰粘膜細胞中的AA和DHA的含量與血漿中AA和DHA的含量有顯著(zhù)相關(guān)，相關(guān)系數r分別為0.36（p=0.042）和0.38 (p=0.033)。口腔頰粘膜細胞中的AA/DHA比值與血漿和紅細胞膜中的AA/DHA的比值無(wú)顯著(zhù)性統計學(xué)差異（p=0.134）。結論測定新生兒口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份能反映新生兒體內的脂肪營(yíng)養狀況，由于采集口腔頰粘膜細胞較為簡(jiǎn)便易行，對嬰兒無(wú)創(chuàng )傷，易為家屬接受，因此特別適用于對新生兒和小嬰兒的營(yíng)養調查。

關(guān)鍵詞：頰粘膜細胞；血漿；紅細胞；脂肪酸；嬰兒

 

必需脂肪酸對嬰兒營(yíng)養十分重要，尤其一些長(cháng)鏈多價(jià)不飽和脂肪酸（LCPUFA），如二十二碳六烯酸（DHA）和花生四烯酸（AA）是嬰兒腦和視網(wǎng)膜的重要組成成份[1，2，3]。以往我們要了解嬰兒體內的脂肪營(yíng)養狀況主要是通過(guò)采集嬰兒的血液標本來(lái)進(jìn)行測定。由于嬰兒采血比較困難，而且是創(chuàng )傷性的，家屬往往不容易接受。尤其要對某地區嬰兒進(jìn)行較大樣本的營(yíng)養調查時(shí)，就需要有一種簡(jiǎn)單、方便、易行的方法。最近我們通過(guò)采集嬰兒口腔頰粘膜細胞的方法來(lái)測定嬰兒體內的脂肪酸成份。為了解測定嬰兒口腔頰粘膜細胞能否反映嬰兒體內的脂肪營(yíng)養狀況，我們將口腔頰粘膜細胞中脂肪酸的測定結果與血漿和紅細胞膜中脂肪酸的測定結果進(jìn)行比較。現將嬰兒口腔粘膜細胞中脂肪酸的測定方法，以及與血漿和紅細胞膜中的測定結果比較如下：

 

1 對象與方法

1.1 對象

從2005年9月1日至12月30日采集了在上海交通大學(xué)附屬新華醫院住院的新生兒共32例，其中早產(chǎn)兒5例（胎齡32-36周），足月兒27例（胎齡37-41周），日齡0-30天（平均20天）。所有入選的新生兒需符合以下標準(4)：

(1)無(wú)窒息搶救病史。

(2)嬰兒未進(jìn)行靜脈營(yíng)養，無(wú)輸血及影響腸道營(yíng)養吸收的病史。

(3)其母親在孕期無(wú)糖尿病，結核病，高脂血癥或已知對嬰兒脂肪代謝造成影響的圍產(chǎn)期疾病。

1.2 儀器和設備

采用日本島津公司生產(chǎn)的GC-2010氣相色譜儀，使用石英毛細管柱（0.32mm×60m），柱內涂有0.25μ二氧化硅熔膠（SP2330），采用氫焰離子化檢測器（FID）。分析條件：進(jìn)樣室溫度為250℃，壓力為150KPa，總流量30.7ml/min；進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為1∶12，進(jìn)樣量1μl；檢測室溫度為280℃。采用程序升溫法：初始溫度為140℃，維持3min，以4℃/min升溫至212℃后，以2℃/min升溫至220℃，維持15min至分析結束，總程序時(shí)間40min。

1.3 嬰兒口腔頰粘膜標本的采集

使用適用于新生兒和嬰兒的乳牙刷（臺灣林哥嬰兒用品有限公司生產(chǎn)）。該嬰兒刷可戴在操作者的手指上伸入嬰兒口腔內采集嬰兒頰粘膜標本。在采血當天同時(shí)采集嬰兒口腔頰粘膜標本。為了避免嬰兒口腔中奶汁對測定的干擾，口腔頰粘膜細胞的采集在進(jìn)食前進(jìn)行，采集前用生理鹽水清潔嬰兒口腔。用消過(guò)毒的乳嬰刷輕刮嬰兒口腔粘膜表面，每刮2-3下后將嬰刷放在生理鹽水中洗滌，如此反復約3-4次，然后再采集另一側的口腔頰粘膜細胞。兩側可交替進(jìn)行。將采集的頰粘膜細胞收集在清潔的玻璃試管中，在4℃下3000轉/分，離心10分鐘，將離心后的細胞沉淀物在-80℃冰箱中保存[4]。

血標本采集：將采集到的嬰兒血標本放在含有EDTA的抗凝管中，4℃下6000轉/分，離心10min分離血漿和紅細胞，將血漿置于-80℃冰箱冷藏待測。紅細胞用生理鹽水反復洗3次并離心，最后將上清液棄去。再加入l蒸餾水使紅細胞溶血，然后在4℃下4000轉/分離心1小時(shí)，用移液管將上清液吸去，留在試管底部的乳白色紅細胞膜沉淀物在氮氣下吹干，然后放入-80℃冰箱冷藏待測。

1.4 脂肪酸成份的測定

采用直接酯化一步法對上述各種標本中的總脂肪酸進(jìn)行抽提和酯化。將脂肪的抽提物通過(guò)氣相色譜儀進(jìn)行脂肪酸成份的分析[5]。

1.5 統計學(xué)方法

所有實(shí)驗數據用均值±標準差表示，采用SPSS11.5版統計軟件。差異分析用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有顯著(zhù)統計學(xué)意義。LSD檢驗進(jìn)行組間兩兩比較。當數據不滿(mǎn)足方差齊性檢驗時(shí)，則進(jìn)行LOG轉換后再進(jìn)行方差齊性檢驗。若仍不滿(mǎn)足方差齊性要求，則用非參數統計方法，kruskalWallis和MannWhitney檢驗進(jìn)行組間兩兩比較，結果用計算后所得的校正后的檢驗水準α分析。兩兩相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)檢驗。若滿(mǎn)足相關(guān)則進(jìn)一步用Fishers檢驗回歸方程的顯著(zhù)性。

2 結果

表1顯示采用氣相色譜法可測定嬰兒口腔頰粘膜細胞中和血液中的多種脂肪酸成份，根據各脂肪酸百分含量的高低排序，列出含量占前8位的脂肪酸。從表中可見(jiàn)各組中占前幾位的均是含16和18碳的長(cháng)鏈脂肪酸。頰粘膜細胞與血漿中含量較多的前四位脂肪酸的排序相同，分別是油酸(18∶1n9)，軟脂酸(16∶0)，亞油酸(18∶2n6)和硬脂酸(18∶0)。在紅細胞膜中較長(cháng)鏈的脂肪酸,如花生四烯酸（AA，20∶4n6）和二十二碳六烯酸（DHA，22∶6n3）的百分含量較高。

表1頰粘膜細胞中和血標本中脂肪酸

頰粘膜細胞和血漿及紅細胞中脂肪酸的組成情況見(jiàn)表2。在n3系脂肪酸中α亞麻酸（LNA,18∶3n3）和DHA在各組間的含量均有顯著(zhù)性差異。口腔頰粘膜細胞中DHA的百分含量最低(0.74%)，而血漿和紅細胞中的百分含量較高(分別是2.93%和7.08%,p＝0.00)。另外，口腔頰粘膜細胞中LNA的含量較高(1.29%)，而血漿和紅細胞中較低(分別為0.60%和0.09%,p=0.00)。口腔頰粘膜細胞中的二十碳五烯酸(EPA,20∶5n3)(0.07%)低于血漿(0.16%)和紅細胞膜中的含量(0.16%),(p=0.00)。n6系脂肪酸中，花生四烯酸在各組間均有顯著(zhù)性差異,口腔頰粘膜細胞中的含量(0.93%)低于血漿(4.53%)和紅細胞(10.12%)中的含量。亞油酸在血漿中含量最高(21.19%)，其次為口腔頰粘膜細胞(13.86%)和紅細胞(7.67%)，各組間有顯著(zhù)性統計學(xué)差異(p=0.00)。總的n6系脂肪酸的含量在血漿中最高（26.04±4.55），口腔頰粘膜細胞其次（15.02±3.70）。總的n3系脂肪酸在紅細胞中最高（7.33±1.45），口腔頰粘膜細胞中最低（2.10±0.66）。AA/DHA的比值在各組間均無(wú)顯著(zhù)性統計學(xué)差異(p=0.134)。

 

 

表2頰粘膜細胞與血漿和紅細胞中脂肪酸成份的比較（％）

表3顯示口腔頰粘膜細胞中DHA和AA的含量與血漿和紅細胞膜中含量的相關(guān)關(guān)系，口腔頰粘膜細胞中的AA和DHA的含量與血漿中的含量均相關(guān)，相關(guān)系數r分別為0.36(p=0.042),0.38(p=0.033),而與紅細胞膜中的AA和DHA的含量均不相關(guān)。表4是比較早產(chǎn)兒與足月兒的口腔頰粘膜細胞，血漿和紅細胞膜中的AA與DHA的含量。早產(chǎn)兒頰粘膜細胞中的DHA含量顯著(zhù)高于足月兒，有顯著(zhù)統計學(xué)差異（p＝0.014），頰粘膜細胞中的AA的含量也高于足月兒，但無(wú)統計學(xué)差異（p＝0.156）；早產(chǎn)兒與足月兒在血漿和紅細胞膜中DHA和AA含量的比較均無(wú)顯著(zhù)性統計學(xué)差異。

表3頰粘膜細胞中AA和DHA的含量與血漿和紅細胞膜中含量的相關(guān)分析

 

表4早產(chǎn)兒與足月兒AA與DHA含量的比較（％）

3

 

討論

多年來(lái)對嬰兒脂肪營(yíng)養的研究均需采集嬰兒的血標本，嬰兒采血較為困難，而且是一種創(chuàng )傷性的方法，人們希望能有一種無(wú)創(chuàng )的方法來(lái)進(jìn)行嬰兒脂肪營(yíng)養的研究，特別是對較小的嬰兒和新生兒。通過(guò)口腔頰粘膜細胞來(lái)測定嬰兒體內的脂肪酸成份是一種無(wú)創(chuàng )傷、方便易行、同時(shí)又易為病兒家屬接受的方法。但口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸含量較低,本實(shí)驗采用較靈敏的氣相色譜方法來(lái)測定新生兒口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份并與嬰兒血漿和紅細胞膜中的脂肪酸成份進(jìn)行比較,研究發(fā)現氣相色譜方法可測出嬰兒口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份,并與嬰兒血漿和紅細胞膜中的脂肪酸成份顯著(zhù)相關(guān)。采集嬰兒口腔頰粘膜細胞的方法簡(jiǎn)單易行，便于推廣應用，可作為檢測嬰兒體內脂肪營(yíng)養狀況的一種新的方法。本實(shí)驗的血標本采集僅在新生兒進(jìn)行其它實(shí)驗室檢查時(shí)進(jìn)行，減少了病兒的痛苦。口腔頰粘膜細胞的采集需與血標本的收集在同一時(shí)間進(jìn)行。

Hoffman等報道給不同飲食喂養的嬰兒測定其口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸，如n3系和n6系脂肪酸及它們之間的比值，發(fā)現口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份與他們飲食中的脂肪酸成份相關(guān)，口腔粘膜細胞中DHA的含量與血漿中的DHA含量高度相關(guān)（r＝0.83）；早產(chǎn)嬰兒口腔粘膜細胞中的DHA含量與其視覺(jué)誘發(fā)電位的靈敏度顯著(zhù)相關(guān)(4)。Connor等也報道了嬰兒口腔粘膜細胞中AA和DHA的含量與食物、血漿和紅細胞中的含量都顯著(zhù)相關(guān)[6]。但也有一些作者在動(dòng)物實(shí)驗中發(fā)現小豬口腔粘膜細胞中的DHA含量與血漿和紅細胞膜中的含量無(wú)明顯相關(guān)[7]。各種研究報告結果不同的原因可能與食物中的脂肪酸對機體不同組織的作用時(shí)間長(cháng)短不同有關(guān)。不同組織細胞的代謝周期不同，口腔頰粘膜細胞的更新周期較快約為5天，這與血漿成份的更新周期相似（約7-8天），而紅細胞的更新周期較長(cháng)（約為120天）。所以口腔粘膜細胞和血漿中的脂肪酸成份可能反映近期食物中的脂肪酸成份，而紅細胞膜中的脂肪酸成份可能反映較長(cháng)期飲食中的脂肪營(yíng)養狀況。[4、8、9]。本實(shí)驗也顯示新生兒口腔頰粘膜細胞中的AA和DHA的含量與血漿中的AA和DHA的含量顯著(zhù)相關(guān)。本實(shí)驗也顯示口腔頰粘膜細胞中AA/DHA的比值與血漿和紅細胞膜中的AA/DHA的比值無(wú)顯著(zhù)的統計學(xué)差異，表明口腔粘膜細胞中AA/DHA的比值能反映血漿和紅細胞膜中AA/DHA的比值。

本實(shí)驗發(fā)現早產(chǎn)兒口腔頰粘膜細胞中DHA的含量顯著(zhù)高于足月兒，與足月兒有顯著(zhù)性差異，而其它脂肪酸無(wú)統計學(xué)差異。由于早產(chǎn)兒的例數較少還有待進(jìn)一步研究。由于口腔頰粘膜細胞中脂肪酸的含量較低，本次實(shí)驗僅僅是首次嘗試對頰粘膜細胞中脂肪酸成份的測定，還未比較與食物中脂肪酸成份的關(guān)系。AA和DHA目前是人們研究的熱點(diǎn)，它們不僅與人體許多生理功能有關(guān)，而且是組成細胞膜的重要成份[10]。

總之，本研究結果顯示，采用氣相色譜法可測定新生兒口腔頰粘膜細胞中的脂肪酸成份來(lái)反映新生兒體內的脂肪營(yíng)養狀況，口腔粘膜細胞中的DHA和AA的含量與血漿中的含量顯著(zhù)相關(guān)。口腔頰粘膜細胞中的AA/DHA比值能反映血漿和紅細胞膜中的AA/DHA的比值。由于口腔粘膜細胞的采集較為簡(jiǎn)便易行，而且是無(wú)創(chuàng )性的，對于采血較為困難的人群，如新生兒和小嬰兒可進(jìn)行較大范圍和較大樣本的營(yíng)養調查。為了進(jìn)一步提高實(shí)驗的正確度，避免嬰兒口腔中殘留的食物對測定結果的影響，下一步實(shí)驗我們準備測定嬰兒口腔頰粘膜細胞中的磷脂來(lái)進(jìn)行脂肪酸成份的分析。

 

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